| 研究概要 |
1)ライソソーム病の中枢神経系におけるα-シヌクレインの発現の確認
GM1蓄積病、GM2蓄積病、ゴーシェ病、異染性白質ジストロフィー患者、副腎白質ジストロフィー患者の脳を抗α-シヌクレイン抗体で免疫染色した。α-シヌクレインは、全ての検体で蓄積が認められた(現在投稿中)。
2)hexb-/-,Asyn-/-マウスの作製
サンドホフ病モデルマウスであるhexb-/-マウス(SDマウス)とα-シヌクレイン遺伝子を破壊したAsyn-/-マウスを交配しhexb-/-,Asyn-/・マウス(DKOマウス)を作製した。作製したDKOマウスは、mRNAレベル、タンパクレベルでhexb及びα-シヌクレインが産生されていないことを確認した。
3)DKOマウス表現型の解析
DKOマウスは、12週齢頃より神経症状を呈し、15週齢頃に死亡した。神経症状、寿命に関しては、SDマウスと比較して有意な差は見られなかった。
4)形態を主体とした検索
DKOマウスの中枢神経系を各抗GM2,GA2抗体で免疫染色した。GM2,GA2は、SDマウスと同様程度に蓄積していた。蓄積量を定量した結果、DKOマウス,SDマウスに免疫染色の結果同様に蓄積量の違いは見られなかった。一方、中枢神経系での炎症反応をマーカーであるTNF-αの発現量、アポトーシスをTUNEL法でそれぞれ確認したが共にDKOマウスとSDマウスの間に有意な差は見られなかった。
5)今後の研究
α-シヌクレインは、アルツハイマー病等多くの神経変性疾患で神経細胞に蓄積していることが知られている。本研究では、サンドホフ病におけるα-シヌクレインの役割を研究したが、少なくとも個体レベルでのα-シヌクレインの影響は見られなかった。近年、神経変性疾患において毒性を持つα-シヌクレインの繊維化を防ぐためにガングリオシドがα-シヌクレインに結合することが報告された(Martinez A, Biochemistry.2007)。即ち、サンドホフ病では、蓄積しているGM2,GA2がα-シヌクレインと結合し、α-シヌクレインの毒性を結果的に抑制していることが示唆される。今後、ガングリオシドがα-シヌクレインの繊維化を抑制する詳しい機構を研究する。
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