| 研究課題/領域番号 |
17791523
|
|---|
| 研究種目 |
若手研究(B)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
矯正・小児系歯学
|
|---|
| 研究機関 | 岡山大学 |
|---|
研究代表者 |
川邉 紀章 岡山大学, 医学部・歯学部附属病院, 助手 (00397879)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2005 – 2006
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2006年度)
|
| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2006年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円)
2005年度: 2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
|
|---|
| キーワード | CTGF / 骨芽細胞 / 機械的刺激 |
|---|
| 研究概要 |
マウスCTGFプロモーターをクローニングするために、鋳型としてマウス骨髄細胞より調製されたゲノムDNAライブラリーを作製した。Abrahamら(J.Boil.Chem.,2000)により発表されたマウスCTGFプロモーター領域にはTGF-β・TNF-αといった、骨芽細胞の分化に影響を及ぼすサイトカインに応答する領域が存在することが報告されている。従って、この報告と同じプロモーター領域(-805から+17)をクローニングするためにプライマーを設計し、PCRにてクローニングを行った。PCRにより得られたCTGFプロモーター断片は、TAクローニングベクターへ組み込み、DNAシークエンサーにて塩基配列の確認を行った後に、改めてpGL3 Basic Vectorへ組み込んだ(pmCTGF-pGL3)。得られたpmCTGF-pGL3はマウス骨芽細胞様細胞株であるMC3T3-E2細胞にLipofectAMINE法にて遺伝子導入を行い、フローサイトメトリーにて単一細胞コロニーを分離し、pmCTGF-pGL3の組み込まれたネオマイシン耐性遺伝子陽性細胞株の樹立を行った。また、制限酵素を用いてこのCTGFプロモーターから欠損型プロモーターを作成し、上記の方法と同様にpGL3 Basic Vectorへ組み込み、MC3T3-E2へ遺伝子導入を行い、細胞株樹立を行った。これらの細胞株を複数用いて、機械的刺激におけるCTGFプロモーターの活性化についての検討を、刺激時間等の条件を変化させながら行った。
今後は、さらにこの欠損型プロモーターを詳しく解析し、機械的刺激によるCTGFプロモーターのエンハンサーおよびサブレッサー領域の同手、およびプロモーターの制御メカニズムについて解析していく予定である。
|
