| 研究概要 |
研究代表者らが過去に樹立したfibroblast growth factor receptor 2(FGFR2)IIIc、FGFR2IIIcS252Wおよび可溶型FGFR2IIIcS252W(sFGFR2IIIcS252W)を恒常発現するヒト骨肉腫由来骨芽細胞MG63細胞よりRNAを抽出し、マイクロアレイ法により発現遺伝子について検討を行った。Apoptosis-inducing factor(AIF)-like mitochondrion-associated inducer of death, Death-associated protein(DAP), Caspase 9, apoptosis-related cysteine peptidase, Cell division cycle associated 1(CDC1), Cell division cycle 2(CDC2)の遺伝子発現に有為差が認められた。これらは細胞増殖およびアポトーシスに関連性が高い因子であり、すなわち、FGFR2IIIcS252Wは骨肉腫細胞においてアポトーシスを亢進させ、細胞周期関連因子の発現に影響を与えることで細胞増殖抑制効果が現れる可能性が考えられた。単離したヒトfibroblast growth factor receptor 2(FGFR2)IIIc、FGFR2IIIcS252Wおよび可溶型FGFR2IIIcS252W(sFGFR2IIIcS252W)をadeno-associated virus vector(pAAV MCS vector ; AAV-Heper Free System ; Stratagene)のBamHl/Xhol制限酵素サイトに組み込み、発現ベクターを構築した。また、FGFR2IIIcのisomerで、上皮系の細胞に重要な働きを担うFGFR2IIIbおよびFGFR2IIIbS252Wについても同様に発現ベクターを構築した。構築した各発現ベクターをCOS-1細胞に一過性にトランスフェクションし、目的蛋白質の発現を、抗FGFR2抗体を用いたWesternblot法にて確認した。現在、ヒト胎児腎由来AAV-293細胞にpAAV-RC vector(rep/cap遺伝子搭載)、pHelper vectorとリン酸カルシウム法にてco-transfectionし、ベクター精製を行っている。
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