TNF-α産生を制御する新規転写因子の同定

• 研究課題/領域番号: 17791555
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 歯周治療系歯学
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 小柳津 功介 岡山大, 医歯(薬)学総合研究科, 助手 (30379838)
• 研究期間 (年度): 2005 – 2006
• 研究課題ステータス: 完了 (2006年度)
• 配分額: 3,400千円 (直接経費: 3,400千円); 2006年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円); 2005年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
• キーワード: TNF-α / THP-1細胞 / 4-Methoxy-a-methylphenethylamine / lipopolysaccalide

研究概要

1.TNF-α産生最適条件の決定
細胞を分化させる4-Methoxy-a-methylphenethylamine(PMA)および細胞を刺激しTNF-α産生を促すlipopolysaccalide(LPS)をそれぞれ0-1000nMおよび0-400ng/mlの各濃度でTHP-1細胞に作用させた後,THP-1細胞が産生するTNF-α量をEnzyme-Linked Immunosorbent Assay法を用いて測定し,TNF-α産生最適条件を検討した。その結果,100nM PMAで分化させた後,100ng/ml LPSで刺激した場合にTHP-1細胞のTNF-α産生量が最大になることが分った。
2.cDNAライブラリーの作製
上記結果に基づき100nM PMA分化および100ng/ml LPS刺激したTHP-1細胞からmRNAを回収した。回収したmRNAを鋳型として逆転写酵素を用いてcDNAライブラリーを作製した。
3.cDNAライブラリーの確認
ベクターに組み入れるためのLDアダプターをcDNAライブラリーに付与した後,Polymerase Chain Reaction法にてcDNAを増幅させた。この増幅させたcDNAを電気泳動法にてアガロースゲルに展開し,様々な大きさのcDNAが増幅されていることを確認した。