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液胞型 ATPase の全体構造決定を突破口とした回転プロトン輸送機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号 17H03648
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 構造生物化学
研究機関京都産業大学

研究代表者

横山 謙  京都産業大学, 生命科学部, 教授 (70271377)

研究分担者 光岡 薫  大阪大学, 超高圧電子顕微鏡センター, 教授 (60301230)
研究期間 (年度) 2017-04-01 – 2020-03-31
研究課題ステータス 完了 (2019年度)
配分額 *注記
17,940千円 (直接経費: 13,800千円、間接経費: 4,140千円)
2019年度: 3,250千円 (直接経費: 2,500千円、間接経費: 750千円)
2018年度: 3,640千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 840千円)
2017年度: 11,050千円 (直接経費: 8,500千円、間接経費: 2,550千円)
キーワードクライオ電子顕微鏡 / 構造解析 / 生体エネルギー変換 / V-ATPase / ATP合成 / エネルギー変換 / 分子モーター / 構造生物学 / 原子モデル / ATP合成酵素 / bioenergetics / ATP 合成酵素 / cryoEM / ATP synthase / 単粒子解析 / bioenergatics / rotary motor
研究成果の概要

ATP合成酵素は、膜領域を通るプロトンの流れを回転運動に変換し、ATPを合成するエネルギー変換装置である。本課題研究では、好熱性細菌由来のV/A型ATP合成酵素の全体構造を、低温電子顕微鏡を使った単粒子解析で明らかにした。さらに3つの回転状態を同定し、回転する様子を再現した。次に、Vo 部分だけを単離し、クライオ電顕による単粒子解析で、原子分解の密度マップを得ることができ、そこから膜内在性 Voの両側からの明確なプロトン移動経路を明らかにした。V1 部分および Vo部分の原子モデルからVoV1 全体の全原子モデルを構築した。

研究成果の学術的意義や社会的意義

クライオ電子顕微鏡による構造解析は、近年急速に発展した分野であり、生命現象を原子レベルで理解することを可能にする強力な手法である。また、タンパク質を標的とした薬剤設計に有効で、たとえばコロナウイルスの膜タンパク質に対する薬剤開発も可能にする。我々は、早い段階でこの手法に着目し、国内でははじめて複雑な膜タンパク質複合体の構造解析に成功し、この分野の進展に大きく貢献する成果となった。

報告書

(4件)
  • 2019 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2018 実績報告書
  • 2017 実績報告書
  • 研究成果

    (24件)

すべて 2019 2018 2017 その他

すべて 雑誌論文 (4件) (うち国際共著 1件、 査読あり 3件、 オープンアクセス 4件) 学会発表 (18件) (うち国際学会 3件、 招待講演 6件) 備考 (2件)

  • [雑誌論文] Cryo-EM studies of the rotary H<sup>+</sup>-ATPase/synthase from <i>Thermus thermophilus</i>2019

    • 著者名/発表者名
      Nakanishi Atsuko、Kishikawa Jun-ichi、Mitsuoka Kaoru、Yokoyama Ken
    • 雑誌名

      Biophysics and Physicobiology

      巻: 16 号: 0 ページ: 140-146

    • DOI

      10.2142/biophysico.16.0_140

    • NAID

      130007701812

    • ISSN
      2189-4779
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Cryo EM structure of intact rotary H+-ATPase/synthase from Thermus thermophilus.2018

    • 著者名/発表者名
      #Nakanishi A, #Kishikawa J (#共同筆頭著者), Tamakoshi M, Mitsuoka K, Yokoyama K.
    • 雑誌名

      Nat Commun.

      巻: 9 号: 1 ページ: 89-89

    • DOI

      10.1038/s41467-017-02553-6

    • NAID

      40021660371

    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] General anesthetics cause mitochondrial dysfunction and reduction of intracellular ATP levels.2018

    • 著者名/発表者名
      Kishikawa JI, Inoue Y, Fujikawa M, Nishimura K, Nakanishi A, Tanabe T, Imamura H, Yokoyama K.
    • 雑誌名

      PLoS ONE

      巻: 13 号: 1 ページ: e0190213-e0190213

    • DOI

      10.1371/journal.pone.0190213

    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] クライオ電子顕微鏡による液胞型 ATPase (VoV1) の構造解析2017

    • 著者名/発表者名
      岸川淳一、中西温子、光岡薫、横山謙
    • 雑誌名

      京都産業大学研究所報

      巻: 10 ページ: 99-101

    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
    • オープンアクセス
  • [学会発表] 好熱菌 V/A-ATPase のヌクレオチドフリー構造の解析2019

    • 著者名/発表者名
      古田綾、岸川淳一、中西温子、光岡薫、横山謙
    • 学会等名
      第45回日本生体エネルギー研究会討論会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] 好熱菌 V型 ATP合成酵素の膜内在性ドメイン Voの構造解析2019

    • 著者名/発表者名
      岸川淳一、中西温子、古田綾、加藤貴之、光岡薫、横山謙
    • 学会等名
      第45回日本生体エネルギー研究会討論会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] キメラ軸を持つV1-ATPaseの1分子解析2019

    • 著者名/発表者名
      三谷奈穂、中野敦樹、岸川淳一、横山謙
    • 学会等名
      第45回日本生体エネルギー研究会討論会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] Nanodisc に再構成した好熱菌由来 V-ATPase の単粒子解析2019

    • 著者名/発表者名
      中西温子、岸川淳一、玉腰雅忠、光岡薫、横山謙
    • 学会等名
      生理研研究会 岡崎市
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] Single-particle analysis of lipid nanodisc-reconstituted V-ATPase from Thermus thermophilus2019

    • 著者名/発表者名
      中西温子、岸川淳一、玉腰雅忠、光岡薫、横山謙
    • 学会等名
      第57回日本生物物理学会 宮崎市
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] Single particle analysis of membrane Vo domain of V type ATP synthase2019

    • 著者名/発表者名
      岸川淳一、 加藤 貴之、 古田 綾、 中西 温子、 光岡 薫、 横山 謙
    • 学会等名
      蛋白質科学会年会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] ヒト V-ATPase の発現系構築およびトモグラフィー解析の試み2018

    • 著者名/発表者名
      中西温子、岸川淳一、表弘志、光岡薫、横山謙
    • 学会等名
      第43回日本生体エネルギー研究会討論会
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] クライオ電子顕微鏡による好熱菌 Thermus thermophilus 由来 V 型 ATP 合成酵素の単粒子解析2018

    • 著者名/発表者名
      中西温子、岸川淳一、玉腰雅忠、光岡薫、横山謙
    • 学会等名
      第56回日本生物物理学会
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] クライオ電子顕微鏡による VoV1 の単粒子解析2018

    • 著者名/発表者名
      中西温子、岸川淳一、玉腰雅忠、光岡薫、横山謙
    • 学会等名
      第18回日本蛋白質科学会
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] Structural dynamics of V-ATPase via cryo-EM single molecule analysis2018

    • 著者名/発表者名
      岸川 淳一、中西 温子、玉腰 雅忠、光岡 薫、横山 謙
    • 学会等名
      第18回日本蛋白質科学会年会
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] De novo designed axis works as a rotor of rotary motor2018

    • 著者名/発表者名
      Jun-ichi Kishikawa, Mihori Baba, Atsuko Nakanishi, Kaoru Mitsuoka, Ken Yokoyama
    • 学会等名
      European Bioenergetics Conference 2018
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Cryo-tomography and sub-tomogram averaging of dimeric F type ATP synthase at bovine sub-mitochondrial particle2018

    • 著者名/発表者名
      Jun-ichi Kishikawa, Atsuko Nakanishi, Masatoshi Murai, Kaoru Mitsuoka, Ken Yokoyama
    • 学会等名
      第56回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] はじめてのクライオ電顕2017

    • 著者名/発表者名
      横山 謙
    • 学会等名
      第43回生体エネルギー研究会討論会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] クライオ EM による好熱菌由来 V 型 ATP 合成酵素の単粒子解析2017

    • 著者名/発表者名
      岸川 淳一、中西 温子、光岡 薫、横山 謙
    • 学会等名
      ConBio2017
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] Single-particle analysis of V-type ATPase/synthase from Thermus thermophirus by cryo-EM2017

    • 著者名/発表者名
      中西温子、岸川淳一、光岡薫、横山謙
    • 学会等名
      第55回日本生物物理学会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] 低温電子顕微鏡を用いたトモグラフィ法によるミトコンドリア膜タンパク質複合体の構造解析の試み2017

    • 著者名/発表者名
      岸川 淳一、中西 温子、光岡 薫、横山 謙
    • 学会等名
      第43回生体エネルギー研究会討論会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [学会発表] Cryo-EM structure of intact rotary H+-ATPase/synthase from Thermus thermophilus2017

    • 著者名/発表者名
      中西温子、岸川淳一、光岡薫、横山謙
    • 学会等名
      ConBio2017
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Single-particle analysis of Thermus thermophilus VoV1 by Cryo-EM2017

    • 著者名/発表者名
      中西温子、岸川淳一、横山謙
    • 学会等名
      第17回日本蛋白質科学会
    • 関連する報告書
      2017 実績報告書
  • [備考] ようこそ 生体膜エネルギー研究室へ

    • URL

      http://www.cc.kyoto-su.ac.jp/~yokoken/index-j.htm

    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [備考] ようこそ、生体膜エネルギー研究室へ

    • URL

      http://www.cc.kyoto-su.ac.jp/~yokoken/index-j.htm

    • 関連する報告書
      2017 実績報告書

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公開日: 2017-04-28   更新日: 2021-02-19  

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