| 研究課題/領域番号 |
17J03519
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| 研究種目 |
特別研究員奨励費
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 国内 |
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| 研究分野 |
病態医化学
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| 研究機関 | 東京大学 |
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研究代表者 |
山崎 智子 東京大学, 大学院医学系研究科, 特別研究員(DC2)
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-26 – 2019-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2018年度)
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| 配分額 *注記 |
1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
2018年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2017年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
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| キーワード | NASH / HTS |
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| 研究実績の概要 |
AIMはマクロファージにより産生分泌される血中タンパク質である。健常時は、AIMはIgM五量体に結合し、AIM自体の機能は不活性化されている。しかし、非アルコール性脂肪肝性肝炎(NASH)や急性腎障害(AKI)をはじめとする特定の疾患時には、IgMからAIMが解離し活性化し、AIMのもつ疾患治療効果を発揮する。本年は以下の研究を行った。
①NASH患者におけるAIMの活性化に関する解析ではNAFL、NASH、NASH由来肝癌の患者血清中の活性化AIMを測定した。その結果、NASH由来肝癌患者では、健常人やNAFL、NASH患者と比較し、有意に血中活性化AIM濃度が高値をしめした。また、肝癌診断マーカーとしての有用性を検討したところ、感度88.5%、特異度86%と、既存のウイルス性肝癌マーカーであるAlphafeto. ProteinやPIVKA-IIよりも有用性が高いことが示された。この結果は、筆頭著者として、2017年にJ Gastroenterolに論文発表した。
②AKI時にAIMを活性化させる生理的活性化物質の探索では、AKI時に血中濃度が上昇しているタンパク質を調べ、それらのタンパク質について順次クローニングし、動物細胞HEK293T細胞へ強制発現させたのち精製し、ウェスタンブロッティング法にてAIMのIgMからの解離について判定を行った。その結果、数種類のタンパク質について弱いながらAIM活性化作用を認めた。
③AIM活性化作用をもつ低分子の探索では、活性化AIM（IgMから解離したAIM）のみを検出するハイスループットスクリーニング系であるHomogeneous Time-Resolved FRET (HTRF)を構築した。東京大学薬学部創薬機構が所有する低分子ライブラリーの約20万個の低分子について網羅的なスクリーニングを行った。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
『AIMを活性化する物質』について、非アルコール性脂肪肝患者検体を用いた臨床研究、急性腎障害時に作用する生理的活性化物質、AIM活性化能を持つ低分子化合物のライブラリースクリーニングと、大変広い幅で研究を行った。その都度必要とされる知識や技術が異なるが、常に勉強をし、研究の遂行に努めた。
さらに、いずれの研究も大きな進展が認められる。中でも、臨床研究については、筆頭著者として論文及びshort reviewを発表している。また、日本肝臓学会やアメリカ肝臓学会、酸化ストレスと肝研究会における発表では、その反響の大きさから、インパクトのある研究結果を残すことができていると感じている。他の2つの研究についてもそれぞれ完成に近づいている。生理的AIM活性化因子の同定と、AIM活性化作用をもつ低分子の探索では、共に同定に向けた候補物質の絞り込みが進んでいる。
以上のことから、本年の進捗は期待以上であったと判断する。
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| 今後の研究の推進方策 |
引き続き、AIMをIgMから解離させる（AIMを活性化させる）物質の同定を予定している。AIMを活性化する物質は、実際の疾患時に誘導される生理的AIM活性化因子と、低分子ライブラリーから探索している低分子、以上の2種である。
生理的AIM活性化因子は、プロテオーム解析、網羅的RNA解析から、候補たんぱく質を多数同定しており、順次タンパク質をクローニングしそれぞれのAIM活性化能力をvitroのアッセイ系で検証を行う。また、候補タンパク質が幾つか絞られた時点で、それぞれのタンパク質を欠損させるマウスにAKIモデルを誘導し、AIMが活性化しないか確かめる。
AIM活性化作用を持つ低分子の同定については、HTRFによりAIM活性化作用が認められた低分子についてELISAやウエスタンブロッティング法といった別の系で検証することで、再現性を確認する。その後は、ヒット低分子の構造展開を行い、実際にAIMを活性化する部位や構造の特定を進める。
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