質量分析による血清ビタミンD代謝の包括的評価

• 研究課題/領域番号: 17K15768
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 基金
• 研究分野: 病態検査学
• 研究機関: 千葉大学
• 研究代表者: 石毛 崇之 千葉大学, 医学部附属病院, 臨床検査技師 (30757315)
• 研究期間 (年度): 2017-04-01 – 2020-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2019年度)
• 配分額: 3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円); 2019年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2018年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2017年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
• キーワード: ビタミンD代謝物 / 質量分析 / 遺伝子多型 / 融解曲線分析 / ビタミンD代謝 / 遺伝子多型解析 / Immunoextraction / 1α,25-dihydroxyvitamin D / LC/MS/MS / Immunoextraction; / GC genotype / melting analysis / ビタミンD代謝動態

研究成果の概要

ビタミンDは骨代謝や免疫調節に関連した様々な作用を持つ。ビタミンD代謝の理解の為には、その代謝物の精確な定量方法が必要である。血液中では、ビタミンDおよびその代謝物はGC遺伝子によってコードされるビタミンD結合蛋白質に結合している。本研究では、LC/MS/MSを用いたビタミンD代謝物の精確な定量法を構築した。さらに、ミスマッチ識別能の向上の為に、架橋化核酸を導入したハイブリダイゼーションプローブを用いたGC遺伝子型決定法も構築した。

研究成果の学術的意義や社会的意義

健常者におけるビタミンD代謝物の血清濃度とGC遺伝子多型の詳細な関連が明らかになり、各種疾患とビタミンDの関連を理解するのに有用になることと思われる。LC/MS/MSを用いた高感度かつ高精度な分析法の構築により、ビタミンD代謝動態がより精確に把握できるようになる。臨床検査としても利用することが可能と思われ、LC/MS/MSを用いることで測定費用を低く抑えることができ、放射性廃棄物の問題も軽減できる。

研究成果

• [雑誌論文] Diagnostic Challenges Posed by Preceding Peripheral Neuropathy in Very Late-onset Spinocerebellar Ataxia Type 3 (2019)
  • 著者名/発表者名: Sugiyama A, Sekiguchi Y, Beppu M, Ishige T, Matsushita K, Kuwabara S.
  • 雑誌名: Internal Medicine 巻: 58 号: 1 ページ: 119-122
  • DOI: 10.2169/internalmedicine.1382-18
  • NAID: 130007542250
  • ISSN: 0918-2918, 1349-7235
  • 年月日: 2019-01-01
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Identification of conjugation positions of urinary glucuronidated vitamin D 3 metabolites by LC/ESI‐MS/MS after conversion to MS/MS‐fragmentable derivatives (2019)
  • 著者名/発表者名: Yoshimura Yusuke、Hibi Ryuichiro、Nakata Akiho、Togashi Moeka、Ogawa Shoujiro、Ishige Takayuki、Satoh Mamoru、Nomura Fumio、Higashi Tatsuya
  • 雑誌名: Biomedical Chromatography 巻: - 号: 7
  • DOI: 10.1002/bmc.4538
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Anti-FIRΔexon2, a splicing variant form of PUF60, auto-antibody is detected in the sera of esophageal squamous cell carcinoma. (2019)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi S, Hiwasa T, Ishige T, Rahmutulla B, Kano M, Hoshino T, Minamoto T, Shimada H, Nomura F, Matsubara H, Matsushita K.
  • 雑誌名: Cancer Sci. 巻: 4 号: 6 ページ: 1-10
  • DOI: 10.1111/cas.14024
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Evaluation of analytical factors associated with targeted MEFV gene sequencing using long-range PCR/massively parallel sequencing of whole blood DNA for molecular diagnosis of Familial Mediterranean fever (2019)
  • 著者名/発表者名: Ishige Takayuki、Itoga Sakae、Kawasaki Kenji、Utsuno Emi、Beppu Minako、Sawai Setsu、Nishimura Motoi、Ichikawa Tomohiko、Nomura Fumio、Matsushita Kazuyuki
  • 雑誌名: Clinica Chimica Acta 巻: 495 ページ: 562-569
  • DOI: 10.1016/j.cca.2019.06.001
  • 査読あり
• [雑誌論文] Multiplex PCR and multicolor probes melting for the simultaneous detection of five UGT1A1 variants (2019)
  • 著者名/発表者名: Ishige Takayuki、Itoga Sakae、Kawasaki Kenji、Sawai Setsu、Nishimura Motoi、Nomura Fumio、Matsushita Kazuyuki
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 巻: 587 ページ: 113448-113448
  • DOI: 10.1016/j.ab.2019.113448
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Molecular Nodal Staging Using miRNA Expression in Lung Cancer Patients by Endobronchial Ultrasound-Guided Transbronchial Needle Aspiration (2018)
  • 著者名/発表者名: Inage Terunaga、Nakajima Takahiro、Itoga Sakae、Ishige Takayuki、Fujiwara Taiki、Sakairi Yuichi、Wada Hironobu、Suzuki Hidemi、Iwata Takekazu、Chiyo Masako、Yoshida Shigetoshi、Matsushita Kazuyuki、Yasufuku Kazuhiro、Yoshino Ichiro
  • 雑誌名: Respiration 巻: 96 号: 3 ページ: 267-274
  • DOI: 10.1159/000489178
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Use of the MALDI BioTyper system and rapid BACpro with MALDI-TOF MS for rapid identification of microorganisms causing bacterial urinary tract infection in feline urine samples (2018)
  • 著者名/発表者名: MAEDA Hiroto、HAYASHI Kaori、ISHIGE Takayuki、SUNAGAWA Tomohiro、TANIGAWA Shigeko、MISHINA Mika、WATANABE Toshifumi、SOGAWA Kazuyuki
  • 雑誌名: Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 巻: 80 号: 10 ページ: 1490-1494
  • DOI: 10.1292/jvms.18-0145
  • NAID: 130007496780
  • ISSN: 0916-7250, 1347-7439
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] High-throughput genotyping of GC (vitamin D-binding protein) by melting analysis with locked nucleic acid-incorporating dual hybridization probe for improving mismatch discrimination. (2018)
  • 著者名/発表者名: Ishige T, Satoh M, Itoga S, Nishimura M, Matsushita K, Nomura F.
  • 雑誌名: Clin Chim Acta 巻: 487 ページ: 126-132
  • DOI: 10.1016/j.cca.2018.09.034
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Variant in C-terminal region of intestinal alkaline phosphatase associated with benign familial hyperphosphatasaemia. (2018)
  • 著者名/発表者名: Ishige T, Itoga S, Utsuno E, Nishimura M, Yoshikawa M, Kato N, Matsushita K, Yokosuka O, Nomura F
  • 雑誌名: Journal of medical genetics 巻: 10 号: 10 ページ: 47-53
  • DOI: 10.1136/jmedgenet-2017-104964
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Assessment by Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time-of-Flight Mass Spectrometry of the Effects of Preanalytical Variables on Serum Peptidome Profiles Following Long-Term Sample Storage. (2018)
  • 著者名/発表者名: Tsuchida S, Satoh M, Umemura H, Sogawa K, Takiwaki M, Ishige T, Miyabayashi Y, Iwasawa Y, Kobayashi S, Beppu M, Nishimura M, Kodera Y, Matsushita K, Nomura F
  • 雑誌名: Proteomics. Clinical applications 巻: 15 号: 3 ページ: 47-53
  • DOI: 10.1002/prca.201700047
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Surveillance evaluation of the standardization of assay values for serum total 25-hydroxyvitamin D concentration in Japan. (2018)
  • 著者名/発表者名: Ihara H, Kiuchi S, Ishige T, Nishimura M, Matsushita K, Satoh M, Nomura F, Yamashita M, Kitajima I, Tsugawa N, Okano T, Hirota K, Miura M, Totani M, Hashizume N; Nutrition Division, Japan Society of Clinical Chemistry.
  • 雑誌名: Ann Clin Biochem. 巻: Epub ahead of print 号: 6 ページ: 0-0
  • DOI: 10.1177/0004563218765570
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Improved sensitivity of serum/plasma 1α,25-dihydroxyvitamin D quantification by DAPTAD derivatization (2017)
  • 著者名/発表者名: Ishige Takayuki, Satoh Mamoru, Ogawa Shoujiro, Nishimura Motoi, Matsushita Kazuyuki, Higashi Tatsuya, Nomura Fumio
  • 雑誌名: Clinica Chimica Acta 巻: 473 ページ: 173-179
  • DOI: 10.1016/j.cca.2017.08.033
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Rapid Discrimination between Methicillin-Sensitive and Methicillin-Resistant <i>Staphylococcus aureus</i> Using MALDI-TOF Mass Spectrometry (2017)
  • 著者名/発表者名: Sogawa K, Kobayashi M, Suzuki J, Sanda A, Kodera Y, Fukuyama M
  • 雑誌名: Ｂｉｏｃｏｎｔｒｏｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 巻: 22 号: 3 ページ: 163-169
  • DOI: 10.4265/bio.22.163
  • NAID: 130006105745
  • ISSN: 1342-4815, 1884-0205
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] 高度な遺伝子分析科学技術を用いた遺伝性疾患の病態解析 (2019)
  • 著者名/発表者名: 石毛崇之
  • 学会等名: 第68回日本医学検査学会
  • 招待講演
• [学会発表] 質量分析による主要なビタミンD代謝物の一斉定量への挑戦 (2019)
  • 著者名/発表者名: 石毛崇之、佐藤守、小川祥二郎、西村基、川崎健治、松下一之、東達也、野村文夫
  • 学会等名: 第59回日本臨床化学会年次学術集会
  • 招待講演
• [学会発表] Long range-PCR/大量並列シーケンス解析によるMEFV遺伝子解析におけるライブラリー構築方法の検討 (2019)
  • 著者名/発表者名: 石毛崇之、糸賀栄、北村浩一、西村基、川崎健治、野村文夫、松下一之
  • 学会等名: 日本臨床検査自動化学会第51回大会参加
• [学会発表] ビタミン D 代謝動態評価に必要な解析技術の構築 (2019)
  • 著者名/発表者名: 石毛崇之
  • 学会等名: 第36回日本臨床化学会関東支部例会
  • 招待講演
• [学会発表] 14 kb long-range PCR産物の精製における3種類の精製法の比較 (2018)
  • 著者名/発表者名: 石毛崇之、糸賀栄、北村浩一、松下一之
  • 学会等名: 第67回医学検査学会
• [学会発表] 遺伝子関連検査領域における電気泳動分析を用いた病態解析 (2018)
  • 著者名/発表者名: 石毛崇之
  • 学会等名: 第26回日本臨床化学会 関東支部総会
  • 招待講演
• [学会発表] LC/MS/MSによる血清/血漿1α,25-ジヒドロキシビタミンD定量および分析前変動要因の評価 (2018)
  • 著者名/発表者名: 石毛崇之，佐藤守，小川祥二郎，西村基，松下一之，東達也，野村文夫
  • 学会等名: 第43回日本医用マススペクトル学会年会
• [学会発表] 架橋化核酸を用いた高感度サンガー法によるRAS遺伝子変異解析 (2017)
  • 著者名/発表者名: 石毛崇之、糸賀栄、松下一之
  • 学会等名: 第66回日本医学検査学会
• [学会発表] 遺伝学的検査の実例 (2017)
  • 著者名/発表者名: 石毛崇之
  • 学会等名: 第66回日本医学検査学会
  • 招待講演
• [学会発表] 基準値設定へ向けたビタミンD代謝物測定 (2017)
  • 著者名/発表者名: 佐藤守, 石毛崇之, 小川祥二郎, 戸村円, 山出史也, 西村基, 松下一之, 下条直樹, 東達也, 野村文夫
  • 学会等名: 第42回日本医用マススペクトル学会年会
• [図書] Advances in Clinical Chemistry, Volume 83 (2018)
  • 著者名/発表者名: Gregory Makowski
  • 総ページ数: 246
  • 出版者: Academic Press
  • ISBN: 9780128152072
• [図書] 臨床化学検査技術教本 (2017)
  • 著者名/発表者名: 日本臨床衛生検査技師会
  • 総ページ数: 304
  • 出版者: 丸善出版
  • ISBN: 9784621301753
• [図書] ここが知りたい 遺伝子診療 はてな？BOOK (2017)
  • 著者名/発表者名: 野村文夫、羽田明、長田久夫
  • 総ページ数: 308
  • 出版者: 中外医学社
  • ISBN: 9784498008526