| 研究課題/領域番号 |
17K16057
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 研究分野 |
呼吸器内科学
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| 研究機関 | 自治医科大学 |
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研究代表者 |
瀧上 理子 自治医科大学, 医学部, 助教 (80625707)
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| 研究協力者 |
ソリナ
小林 国彦
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| 研究期間 (年度) |
2017-04-01 – 2019-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2018年度)
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| 配分額 *注記 |
3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円)
2018年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
2017年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
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| キーワード | 肺がん / RNA / 融合遺伝子 / 免役チェックポイント関連因子 / 免役チェックポイント関連遺伝子 / 免疫チェックポイント関連遺伝子 / 臨床呼吸器学 |
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| 研究成果の概要 |
肺がん患者の気管支洗浄液よりRNAを分離しoligo-dT primer SuperScript VILO reverse transcriptaseでcDNAに変換し,Taqman PCR反応により融合遺伝子を検出した.融合遺伝子を認めた検体はAMPure paramagnetic beadsで増幅産物を生成し,direct sequence法でタイピングした.MET,PD-L1をreal-time PCRで検出し,Housekeeping遺伝子OAZ1の発現で基準化した.高速シークエンサーを用いてALK,ROS1,RET,MET,PD-L1の結果を迅速に実臨床に返却するシステムを構築した.
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| 研究成果の学術的意義や社会的意義 |
我々は適切な操作を行えば肺がん患者の気管支洗浄液からRNAを安定に採取できることを見出し,ALK,ROS1,RETなどの融合遺伝子,さらにはMET発現増幅，PD-L1発現について高速シークセンサーを用いて解析し，得られた成果を迅速に実臨床に返却するシステムの構築を行った.これは肺癌細胞での遺伝子変異解析,発現解析の可能性を大きく広げるものである.少量の気管支洗浄液からRNAを抽出し,PCRで増幅させるため組織採取は不要であり,患者への苦痛軽減のみならず,肺がんの治療に直結する結果を得るという意義がある.本研究は,RNA に基づく肺癌治療マーカーの実用化への道を開く可能性がある.
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