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電子線トモグラフィーと結晶学を組み合わせた膜タンパク質の構造解析手法の確立

研究課題

研究課題/領域番号 17K19347
研究種目

挑戦的研究(萌芽)

配分区分基金
研究分野 分子生物学およびその関連分野
研究機関三重大学 (2019)
名古屋大学 (2017-2018)

研究代表者

谷 一寿  三重大学, 医学系研究科, 特任教授(研究担当) (20541204)

研究期間 (年度) 2017-06-30 – 2020-03-31
研究課題ステータス 完了 (2019年度)
配分額 *注記
6,240千円 (直接経費: 4,800千円、間接経費: 1,440千円)
2019年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
2018年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
2017年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
キーワードクライオ電子顕微鏡 / 電子線結晶学 / クライオトモグラフィー / 二次元結晶 / F型ATPase / 負染色 / 膜タンパク質 / 電子線トモグラフィー
研究成果の概要

天然に近い状態の膜タンパク質の立体構造を観察することは、その生理的機能を明らかにするうえで重要な知見が得られる可能性が高い。このような構造解析としては、脂質二重膜中に再構成された膜タンパク質がシート状に整列する二次元結晶を用いた電子線結晶解析が適しているが、たとえ結晶作製に成功しても分解能が悪いことも多く電子線結晶解析に適用できない場合も多々ある。本研究では、このような従来の解析方法では歯がたたなかった結晶性のよくない二次元結晶でも、構造解析が行えるように、電子線トモグラフィーと結晶学を組み合わせた新規手法の確立ならびに評価を行った。

研究成果の学術的意義や社会的意義

構造解析不可能であった結晶性の悪い二次元結晶からでも立体構造が得られるようになった意義は大きい。本手法は、三次元結晶由来の三次元再構成から平面領域を切り出すことができれば、仮想的な二次元結晶として構造解析が可能になる。このように適用範囲は、理論的には二次元結晶から三次元結晶までカバーすることができる点は有用であるが、分解能に関しては、原理上、結晶内の対象物の並び方に依存するため大幅な向上は期待できない。但し、分解能が低い場合でも、X線構造解析などで部分決定された原子モデルをフィッティングできれば、疑似的な原子モデルを作製し、変異体デザインを含めた機能発見といった目的などへ貢献できる。

報告書

(4件)
  • 2019 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2018 実施状況報告書
  • 2017 実施状況報告書
  • 研究成果

    (10件)

すべて 2020 2019 2017

すべて 雑誌論文 (6件) (うち国際共著 1件、 査読あり 5件、 オープンアクセス 4件、 謝辞記載あり 1件) 学会発表 (4件) (うち招待講演 3件)

  • [雑誌論文] Cryo-EM structures of undocked innexin-6 hemichannels in phospholipids2020

    • 著者名/発表者名
      Burendei Batuujin、Shinozaki Ruriko、Watanabe Masakatsu、Terada Tohru、Tani Kazutoshi、Fujiyoshi Yoshinori、Oshima Atsunori
    • 雑誌名

      Science Advances

      巻: 6 号: 7

    • DOI

      10.1126/sciadv.aax3157

    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Structural insights into thermostabilization of leucine dehydrogenase from its atomic structure by cryo-electron microscopy2019

    • 著者名/発表者名
      Yamaguchi Hiroki、Kamegawa Akiko、Nakata Kunio、Kashiwagi Tatsuki、Mizukoshi Toshimi、Fujiyoshi Yoshinori、Tani Kazutoshi
    • 雑誌名

      Journal of Structural Biology

      巻: 205 号: 1 ページ: 11-21

    • DOI

      10.1016/j.jsb.2018.12.001

    • 関連する報告書
      2019 実績報告書 2018 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Crystal structures of claudins: insights into their intermolecular interactions.2017

    • 著者名/発表者名
      H. Suzuki, K. Tani, Y. Fujiyoshi
    • 雑誌名

      Ann. N. Y. Acad. Sci.

      巻: N/A 号: 1 ページ: 25-34

    • DOI

      10.1111/nyas.13371

    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 謝辞記載あり
  • [雑誌論文] The cryo-EM structure of gastric H+,K+-ATPase with bound BYK99, a high-affinity member of K+-competitive, imidazo[1,2-a]pyridine inhibitors2017

    • 著者名/発表者名
      Abe Kazuhiro、Shimokawa Jun、Naito Mao、Munson Keith、Vagin Olga、Sachs George、Suzuki Hiroshi、Tani Kazutoshi、Fujiyoshi Yoshinori
    • 雑誌名

      Scientific Reports

      巻: 7 号: 1 ページ: 6632-6632

    • DOI

      10.1038/s41598-017-06698-8

    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] X-ray structures of endothelin ETB receptor bound to clinical antagonist bosentan and its analog2017

    • 著者名/発表者名
      Shihoya Wataru、Nishizawa Tomohiro、Yamashita Keitaro、Inoue Asuka、Hirata Kunio、Kadji Francois Marie Ngako、Okuta Akiko、Tani Kazutoshi、Aoki Junken、Fujiyoshi Yoshinori、Doi Tomoko、Nureki Osamu
    • 雑誌名

      Nature Structural & Molecular Biology

      巻: 24 号: 9 ページ: 758-764

    • DOI

      10.1038/nsmb.3450

    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] エンドセリンの受容体初期活性化機構2017

    • 著者名/発表者名
      土井 知子、谷 一寿
    • 雑誌名

      医学のあゆみ

      巻: 262 ページ: 812-813

    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
  • [学会発表] クライオ電子顕微鏡を用いた蛋白質の立体構造決定へ向けた技術開発と応用2019

    • 著者名/発表者名
      谷一寿
    • 学会等名
      日本分子生物学会年会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
  • [学会発表] クライオ電子顕微鏡によるタンパク質構造解析とその展開2019

    • 著者名/発表者名
      谷一寿
    • 学会等名
      スマートセルイノベーション研究センター講演会
    • 関連する報告書
      2019 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] クライオ電子顕微鏡で分子構造を観る、 構造情報を活かす2017

    • 著者名/発表者名
      谷 一寿
    • 学会等名
      先端医療センターシンポジウム
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] 創薬へ向けたクライオ電子顕微鏡による膜タンパク質の構造研究2017

    • 著者名/発表者名
      谷 一寿
    • 学会等名
      2017 BIOVIA Forum
    • 関連する報告書
      2017 実施状況報告書
    • 招待講演

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公開日: 2017-07-21   更新日: 2021-02-19  

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