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子宮頚がん発生におけるHPV DNAの組み込みとE6、E7発現増加機構の解明

研究課題

研究課題/領域番号 18012051
研究種目

特定領域研究

配分区分補助金
審査区分 生物系
研究機関国立がんセンター(研究所及び東病院臨床開発センター)

研究代表者

清野 透  国立がんセンター(研究所及び東病院臨床開発センター), 研究所・ウイルス部, 部長 (10186356)

研究分担者 齋藤 真子  国立がんセンター研究所及び東病院臨床開発センター, 研究所・ウイルス部, 研究員 (50283023)
温川 恭至  国立がんセンター研究所及び東病院臨床開発センター, 研究所・ウイルス部, 研究員 (80311372)
松本 義久  東京工業大学, 原子炉工学研究所, 准教授 (20302672)
研究期間 (年度) 2006 – 2007
研究課題ステータス 完了 (2007年度)
配分額 *注記
11,400千円 (直接経費: 11,400千円)
2007年度: 5,800千円 (直接経費: 5,800千円)
2006年度: 5,600千円 (直接経費: 5,600千円)
キーワードHPV / 子宮頸がん / E6 / E7 / 組み込み / DNA-PK / E2F / ヒトパピローマウイルス
研究概要

不死化子宮頸部由来正常細胞株にHPV16ゲノムを導入することで数10-100コピーのHPV16ゲノムをepisomalに維持する細胞株の樹立に成功した.この細胞は従来報告されているものと異なり,feeder細胞なしに長期間維持出来ることが明らかになった.子宮頸部異形成由来の細胞株W12などと異なり,これまでHPVゲノムの細胞ゲノムへの組み込みは確認されていない.この細胞株を用いることで,episomal HPV16ゲノムの維持と組み込み機構ならびに,がん化の引き金になるE6とE7遺伝子の高発現に至る機構の解析が再現性良くできると考えている.この細胞でDNA-PKcs,Ku70,Ku86など非相同組み換え修復に関わる遺伝子発現をノックダウンした.これまでのところ,組み込み頻度への影響は確認出来ていないが,Ku70,Ku86をそれぞれ単独でノックダウンするとKu70,Ku86の両者の蛋白量が減少しDNA-PKcs蛋白量も減少する傾向が見られた.<BR> DNA-PK活性と子宮頸癌との相関は,統計学的に確かであるが,原因が分からずその解明は非常に重要である.DNA-PK活性の個人差が出てくる理由の追及を進め,DNA-PKcs,Ku86,Ku70の発現調節にE2Fファミリーが制御に関わっている可能性を見出した.具体的には,8名(がん患者4名,健常者4名)のリンパ球のマクロアレイ解析を行い,DNA-PK活性やサブユニット発現と相関が強い分子を探索した.その結果,Rap1B,Rad9,XRCC3,SUMO,E2F1,Cyclin D1などの発現が正の相関を示し,逆に,強い逆相関を示したものとしてRbp130が見いだされた.このことから,E2Fファミリーが調節に関わっている可能性を考えられたが,実際,DNA-PKcs,Ku86,Ku70全てのプロモータ領域にE2Fのbinding siteが見つかり,PHAで刺激するとDNA-PK活性とともに,mRNA発現上昇も見られた.更にこれを検証するためには,siRNAなどを用いた実験を進めている.また,E2F以外の転写調節機構が関わる可能性も検討していく必要がある。

報告書

(2件)
  • 2007 実績報告書
  • 2006 実績報告書
  • 研究成果

    (15件)

すべて 2007 2006 その他

すべて 雑誌論文 (12件) (うち査読あり 6件) 学会発表 (2件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] E6AP-dependent degradation of DLG4/PSD95 by high-risk human papillomavirus type18 E6 protein2007

    • 著者名/発表者名
      Handa K, et. al.
    • 雑誌名

      J.Virology 81

      ページ: 1379-1389

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] HPV16 E6-mediated stabihzation of ErbB2 in neoplastic trans formation of human cervical keratinocytes2007

    • 著者名/発表者名
      Narisawa-Saito M, et. al.
    • 雑誌名

      Oncogene 26

      ページ: 2988-2996

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Regulation of Notchl gene expression by p53 in epithelial cells2007

    • 著者名/発表者名
      Yugawa T, et. al.
    • 雑誌名

      Mol Cell Biol 27

      ページ: 3732-3742

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Association of DNA-PK activity and radiationinduced NBSl foci formation in lymphocytes with clinical malignancy in breast cancer patients2007

    • 著者名/発表者名
      Someya M, et. al.
    • 雑誌名

      Oncology Reports 18

      ページ: 873-878

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] cDNA analysis of gene expression associated with DNA-dependent protein-kinase activity2007

    • 著者名/発表者名
      Sakata K, et. al.
    • 雑誌名

      Int.J.Oncol 30

      ページ: 413-420

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] E6AP-dependent degradation of DLG4/PSD95 by high-risk human papillomavirus tvpe 18 E6 protein.2007

    • 著者名/発表者名
      Handa K et al.
    • 雑誌名

      J. Virol. 81

      ページ: 1379-1389

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Efficient immortalization of primary human cells by p16^<Ink4a>-specific short hairpin RNA or Bmi-1, combined with introduction of hTERT.2007

    • 著者名/発表者名
      Haga K et al.
    • 雑誌名

      Cancer Sci. 98

      ページ: 147-154

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Identification of an HLA-A24-restricted cytotoxic T lymphocyte epitope from human papi llomavirus type-16 E6 : The combined effects of bortezomib and interferon- gamma on the presentation of a cryptic epitope.2006

    • 著者名/発表者名
      Morishima S et al.
    • 雑誌名

      Int J Cancer 120

      ページ: 594-604

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Creation of tumorigenic human endometrial epithelial cells with inta ct chromosomes by introducing defined genetic elements.2006

    • 著者名/発表者名
      Mizumoto Y et al.
    • 雑誌名

      Oncogene 25

      ページ: 5673-5682

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Efficient immortalization of primary human cells by p161nk4a-specific short hairpin RNA or Bmi-1,combined with introduction of hTERT

    • 著者名/発表者名
      Haga K, et. al.
    • 雑誌名

      Cancer Science

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Regulation of Notch1 gene expression by p53 in epithelial cells.

    • 著者名/発表者名
      Yugawa T et al.
    • 雑誌名

      Mol Cell Biol (In press)

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] HPV16 E6-mediated stabilization of ErbB2 in neoplastic transformation of human cervical keratinocvtes.

    • 著者名/発表者名
      Narisawa-Saito M et al.
    • 雑誌名

      Oncogene (In press)

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [学会発表] Down-regulation of Notchl tumor suppressor and inhibition of keratinocyte diffrentiation by HPV-16E62007

    • 著者名/発表者名
      Yugawa T, et. al.
    • 学会等名
      24th International Papillomavirus Conference
    • 発表場所
      北京
    • 年月日
      2007-11-06
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] Analysis of HPV-induced multistep carcinogenesis of cervical cancer using normal human cervical keratinocytes2007

    • 著者名/発表者名
      Marisawa-Saito M, et. al.
    • 学会等名
      24th International Papillomavirus Conference
    • 発表場所
      北京
    • 年月日
      2007-11-06
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [備考]

    • URL

      http://www.ncc.go.jp/jp/nccri/divisions/10vir/10vir.html

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書

URL: 

公開日: 2006-04-01   更新日: 2018-03-28  

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