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新規クロマチンインシュレータを搭載した遺伝子治療ベクターの開発

研究課題

研究課題/領域番号 18015044
研究種目

特定領域研究

配分区分補助金
審査区分 生物系
研究機関自治医科大学

研究代表者

久米 晃啓  自治医科大学, 医学部, 准教授 (10264293)

研究期間 (年度) 2006 – 2007
研究課題ステータス 完了 (2007年度)
配分額 *注記
10,600千円 (直接経費: 10,600千円)
2007年度: 5,300千円 (直接経費: 5,300千円)
2006年度: 5,300千円 (直接経費: 5,300千円)
キーワード癌 / 遺伝子 / ゲノム / 移植・再生医療 / トランスレーショナルリサーチ
研究概要

クロマチンインシュレータは、近傍遺伝子に対する干渉を防ぐとともに、ヘテロクロマチン化を阻止して当該遺伝子の発現を安定化するシスエレメントである。標的細胞に導入した治療用遺伝子の発現維持と、ベクター挿入変異・発癌リスクの低減を目的として、ヒト19番染色体長腕末端部近く(AAVS1領域)のインシュレータ利用を試みた。(1)部位特異的組み込みによるインシュレータ利用:アデノ随伴ウイルスのRep蛋白はAAVS1領域にゲノムを組み込む働きをもつが、この領域には癌関連遺伝子がなく安全であり、しかもインシュレータ配列を有するため治療用遺伝子を組み込むのに好適である。間質幹細胞株UEET1へのヒト凝固第IX因子遺伝子導入に際して一過性にRepを働かせ、一定の頻度(6/58)でAAVS1領域への組み込みがみられたが、第IX因子発現は長続きしなかった。AAVS1領域への遺伝子組み込みに伴って大半のクローンでインシュレータ配列が破壊され、プロモータのCpG配列が広範にメチル化されていたことが原因と考えられた。単純にRepを用いてAAVS1領域に遺伝子を組み込むアプローチには限界がある。(2)インスレータ搭載ベクター:AAVS1インシュレータをGFP発現カセットの両端にそれぞれ向きを変えて配置し、インシュレータなしと合わせて5種類のレトロウイルスベクターを構築した。夫々のコンストラクトで遺伝子導入したK562白血病細胞クローンを樹立後、GFP発現の推移を1年以上観察した。インスレータなし(3/11)に比べ、インスレータで挟むと中等度以上の発現を維持する率は向上し、インスレータの向きによる違いも見られた(5/11、4/10、9/11、5/10)。5'テロメア側-3'セントロメア側の向きをもつインシュレータで前後を挟んだものが最も成績が良く、さらに改良を加えれば実用性が向上すると考えられる。

報告書

(2件)
  • 2007 実績報告書
  • 2006 実績報告書
  • 研究成果

    (11件)

すべて 2008 2007 2006

すべて 雑誌論文 (9件) (うち査読あり 3件) 学会発表 (2件)

  • [雑誌論文] Protection against aminoglycoside-induced ototoxicity by regulated AAV vector-mediated GDNF gene transfer into the cochlea.2008

    • 著者名/発表者名
      Liu Y et al
    • 雑誌名

      Molecular Therapy 16

      ページ: 474-480

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Adeno-associated virus vector-mediated sysyemic interleukin-10 expression ameliorates hypertensive organ damage in Dahl salt-sensitive rats.2008

    • 著者名/発表者名
      Nonaka-Sarukawa M et al
    • 雑誌名

      The Journal of Gene Medicine 10

      ページ: 368-374

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Adenoassociated virus-mediated prostacyclin synthase expression prevents pulmonary arterial hypertension in rats.2007

    • 著者名/発表者名
      Ito T et al
    • 雑誌名

      Hypertension 50

      ページ: 531-536

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Suppression of ovarian cancer by muscle-mediated expression of soluble VEGFR-1/Flt-1 using adeno-associated virus serotype 1-derived vector2007

    • 著者名/発表者名
      Takei Y et al.
    • 雑誌名

      International Journal of Cancer 120・2

      ページ: 278-284

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Prevention of diabetic retinopathy by intraocular soluble flt-1 gene transfer in a spontaneously diabetic rat model.2007

    • 著者名/発表者名
      Ideno J et al.
    • 雑誌名

      International Journal of Molecular Medicine 19・1

      ページ: 75-79

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] A histone deacetylase inhibitor enhances recombinant adeno-associated virus-mediated gene expression in tumor cells.2006

    • 著者名/発表者名
      Okada T et al.
    • 雑誌名

      Molecular Therapy 13・4

      ページ: 738-746

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Removal of empty capsids from type 1 adeno-associated virus type vector stocks by anion-exchange chromatography potentiates transgene expression.2006

    • 著者名/発表者名
      Urabe M et al.
    • 雑誌名

      Molecular Therapy 13・4

      ページ: 823-828

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Utility of intraperitoneal administration as a route of AAV serotype 5 vector-mediated neonatal gene transfer.2006

    • 著者名/発表者名
      Ogura T et al.
    • 雑誌名

      The Journal of Gene Medicine 8・8

      ページ: 990-997

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Adipose tissue as a novel target for in vivo gene transfer by using adeno-associated virus vectors.2006

    • 著者名/発表者名
      Mizukami H et al.
    • 雑誌名

      Human Gene Therapy 17・9

      ページ: 921-928

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [学会発表] Efficient and stable liver transduction by a self-complementary adeno-associated virus vector for phenylketonuria gene therapy.2007

    • 著者名/発表者名
      Kume A et al
    • 学会等名
      Japan Society of Gene Therapy
    • 発表場所
      Nagoya
    • 年月日
      2007-06-28
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] Long-term efficacy of a self-complementary adeno-associated virus vector for phenylketonuria gene therapy.2007

    • 著者名/発表者名
      Kume A et al
    • 学会等名
      American Society of Gene Therapy
    • 発表場所
      Seattle, WA, USA
    • 年月日
      2007-05-31
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書

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公開日: 2006-04-01   更新日: 2018-03-28  

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