• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 前のページに戻る

細菌べん毛モーターの回転子複合体と固定子複合体の結晶化

研究課題

研究課題/領域番号 18054010
研究種目

特定領域研究

配分区分補助金
審査区分 生物系
研究機関名古屋大学

研究代表者

小嶋 誠司  名古屋大学, 理学研究科, 助教 (70420362)

研究分担者 本間 道夫  名古屋大学, 理学研究科, 教授 (50209342)
研究期間 (年度) 2006 – 2007
研究課題ステータス 完了 (2007年度)
配分額 *注記
6,500千円 (直接経費: 6,500千円)
2007年度: 3,300千円 (直接経費: 3,300千円)
2006年度: 3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
キーワード蛋白質 / 分子モーター / 生物物理 / ナノマシン
研究概要

1)海洋性ビブリオ菌極べん毛モーター固定子複合体PomA/PomBの結晶化へ向けた大量発現と精製
細菌べん毛モーターのエネルギー変換機構を理解するためには、共役イオンの流入に共役したトルク発生を担う、固定子複合体の立体構造を解明することが必須である。我々はNa^+駆動型のビブリオ菌を材料に用い、PomA/PomB固定子複合体の結晶化に向けて、ヒスチジンタグを融合した複合体の大腸菌での大量発現系を構築した。現在、膜画分からの抽出に最適な界面活性剤のスクリーニングを行っている。
2)サルモネラ菌固定子蛋白質MotBのペリプラズム断片の結晶化
我々は固定子複合体だけでなく、可溶性断片による部分構造の結晶化も進めてきた。特に固定子蛋白質MotBは、そのC末端側に固定に関わるペプチドグリカン結合モチーフを持ち、部分構造としても興味深い。サルモネラ菌を材料に、このモチーフを含む可溶性のMotB断片(MotB_c)を作成し解析した。MotB_cは野生株の運動能を低下させることから、野生型MotBとヘテロダイマーを形成し固定子複合体の集合を阻害するか、モーター中の固定子結合部位に作用していると予想され、またペリプラズムにおいて安定な二量体を形成していた(文献1)。MotB_cの精製は容易で、1リットル培養あたり25mg程度の精製標品が得られる。結晶化が難航したため、MotB_cのNMRスペクトル解析を行ったところ、N末端側とC末端側の構造が不安定であることが予想された。そこで、これら両末端を削った複数種のMotB_c断片を作成し結晶化条件を探索したところ、N末端を10残基、C末端を18残基欠失させた断片MotB_<c6>において、実験室でのX線回折実験で高い分解能の回折像を得ることができた。現在Spring-8での回折実験を目標とし、MotB_<c6>のセレノメチオニン置換体結晶を準備している。

報告書

(2件)
  • 2007 実績報告書
  • 2006 実績報告書
  • 研究成果

    (5件)

すべて 2008 2007 2006

すべて 雑誌論文 (4件) (うち査読あり 2件) 学会発表 (1件)

  • [雑誌論文] Characterization of the periplasmic domain of MotB and implications for its role in the stator assembly of the bacterial flagellar motor2008

    • 著者名/発表者名
      Kojima S, Furukawa Y, Matsunami H, Minamino T, Namba K
    • 雑誌名

      Journal of Bacteriology 190

      ページ: 3314-3322

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Systematic Cys mutagenesis of FlgI, the flagellar P-ring component of Escherichia coli2008

    • 著者名/発表者名
      Hizukuri Y, Kojima S, Yakushi T, Kawagishi I and Homma M
    • 雑誌名

      Microbiology 154

      ページ: 810-817

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Crystallization and preliminary X-ray analysis of MotY, a stator component of the Vibrio alginolyticus polar flagellar motor2007

    • 著者名/発表者名
      Shinohara A, Sakuma M, Yakushi, T, Kojima S, Namba, K, Homma M, Imada K
    • 雑誌名

      Acta Crystallographica F63

      ページ: 89-92

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] The Vibrio motor proteins, MotX and MotY, are associated with the basal body of Na^+-driven flagella and required for stator formation2006

    • 著者名/発表者名
      Terashima H, Fukuoka H, Yakushi, T, Kojima S, Homma M
    • 雑誌名

      Molecular Microbiology 62

      ページ: 1170-1186

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [学会発表] 細菌べん毛モーター固定子タンパク質MotBのペリプラズム側断片の精製と結晶化2007

    • 著者名/発表者名
      小嶋誠司
    • 学会等名
      日本生物物理学会第45回年会
    • 発表場所
      パシフィコ横浜
    • 年月日
      2007-12-22
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書

URL: 

公開日: 2006-04-01   更新日: 2018-03-28  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi