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新しい内在性小分子RNAによるDECODE調節機構とRNAiの関係の解明

研究課題

研究課題/領域番号 18055018
研究種目

特定領域研究

配分区分補助金
審査区分 生物系
研究機関京都大学

研究代表者

田原 浩昭  京都大学, 医学研究科, 客員研究員 (90362524)

研究分担者 青木 一真  京都大学, 医学研究科, 科学技術振興助手 (90362508)
研究期間 (年度) 2006 – 2007
研究課題ステータス 完了 (2007年度)
配分額 *注記
7,500千円 (直接経費: 7,500千円)
2007年度: 3,900千円 (直接経費: 3,900千円)
2006年度: 3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
キーワードRNAi / 線虫 / C. elegans / C.elegans
研究概要

RNAiとは真核生物の細胞に二本鎖RNAを導入した場合に相同配列を持つ遺伝子の発現抑制が生じる現象であり、遺伝子発現を制御する新しい手段として有用である。我々は線虫C. elegansをモデル生物として用いてRNAiの反応機構について研究を行っている。これまで不十分であった生化学的な解析を進めるために、線虫の細胞抽出液を用いてRNAiを再現する無細胞反応系を本研究の準備期間に開発してきた。
前年度の研究において、線虫の細胞抽出液中で長いRNAの導入に伴ってsiRNAに類似した小分子RNAを産生するRNA依存性RNAポリメラーゼ(RdRP)の活性を見いだしていた。本年度にさらに詳しい解析を進めたところ、そのRdRP活性はRdRPドメインを持つRRF-1に主として対応することが分かった。そして、RRF-1複合体によってin vitroで合成された小分子RNAはDicerの産物である一次型siRNAとは構造が異なっており二次型siRNAの特徴を持っていること、RRF-1が合成した産物の多くは5'末端にグアニンを持つことを明らかとした。又、線虫におけるRNAi反応下流におけるmRNAの配列特異的な切断(RISC)活性を無細胞反応系で検出してきており、その活性を担う分子実体を探索した。様々なRNAi欠損変異体から細胞抽出液を調製しRISC活性を測定する実験を行った結果、二次型siRNAによって誘導されるRISC活性がArgonaute変異体の一つであるcsr-1において損なわれていることを見つけた。又、CSR-1のリコンビナント蛋白が二次型siRNAと一緒にmRNA切断活性を示すことも確認した。

報告書

(2件)
  • 2007 実績報告書
  • 2006 実績報告書
  • 研究成果

    (3件)

すべて 2007

すべて 雑誌論文 (1件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (2件)

  • [雑誌論文] In vitro analyese of the production and activity of secondary small interfering RNAs in C. elegans2007

    • 著者名/発表者名
      Aoki, K., Moriguchi, H., Yoshioka, T., Okawa, K., & Tabara, H.
    • 雑誌名

      The EMBO Journal 26

      ページ: 5007-5019

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] Biochemical genetic analyses of RdRP and Slicer activities related to RNAi in C. elegans2007

    • 著者名/発表者名
      Akoi, K., Moriguchi, H., Okawa, K., & Tabara, H.
    • 学会等名
      16th International C. elegans Conference
    • 発表場所
      Los Angeles, USA
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] C.elegans における二次型 siRNA の産生と活性についての遺伝生化学的解析2007

    • 著者名/発表者名
      田原浩昭、森口比呂美、小川宣仁、浅沼高寛、大川克也、青木一真
    • 学会等名
      第30回日本分子生物学会年会・第80回日本生化学会大会(合同大会)
    • 発表場所
      横浜、神奈川
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書

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公開日: 2006-04-01   更新日: 2018-03-28  

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