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エクトドメインシェディングに関わる遺伝子の網羅的同定と分子メカニズムの解明

研究課題

研究課題/領域番号 18370079
研究種目

基盤研究(B)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 細胞生物学
研究機関大阪大学

研究代表者

目加田 英輔  大阪大学, 微生物病研究所, 教授 (20135742)

研究分担者 水島 寛人  大阪大学, 微生物病研究所, 助教 (30379094)
麻野 四郎  大阪大学, 微生物病研究所, 特任研究員 (00397613)
研究期間 (年度) 2006 – 2007
研究課題ステータス 完了 (2007年度)
配分額 *注記
17,270千円 (直接経費: 15,500千円、間接経費: 1,770千円)
2007年度: 7,670千円 (直接経費: 5,900千円、間接経費: 1,770千円)
2006年度: 9,600千円 (直接経費: 9,600千円)
キーワードエクトドメインシェディング / siRNA / HB-EGF / DNAアレイ / シェディング / レンチウィルス
研究概要

エクトドメインシェディングとは、細胞膜蛋白質が細胞表面でプロテアーゼによる切断を受け、その細胞外ドメインが培養液中に放出される現象を示し、膜タンパク質の活性制御に非常に重要な意味を持つ。本研究の目的は、これまでのHB-EGF研究をベースに、シェディングに関る分子群を明らかにし、シェディングの調節機構と生物学的意義の解明を行うことである。この目的のために、以下の実験を計画した。1)HB-EGFを発現したヒト細胞にsiRNA発現ライブラリーを組み込まれたレンチウィルスベクターを感染し、siRNA発現細胞を得る。2)この細胞にエクトドメインシェディング誘導薬であるTPAを作用させると、ほとんどの細胞ではシェディングが誘導されるが、シェディングが起こらない細胞群を抗HB-EGF抗体で染色して、これをセルソーターで選別する。3)得られた細胞群の中で発現が低下している遺伝子をDNAアレイの手法で同定することで、エクトドメインシェディングに関わる遺伝子を網羅的に明らかにする。4)シェディングに関わることが示唆された遺伝子について個別に詳しく検証し、シェディング機構にどのように関わっているのか明らかにする。まず我々はジフテリア毒素耐性細胞のスクリーニングを行い、この手法が実際に稼働するかどうかの検証を行い、本法によって既知の遺伝子に加えて新規遺伝子の同定が可能であることを明らかにした。続いて、同手法にて、シェディングに関る分子群をスクリーニングし、候補遺伝子のリストを得た。現在、得られた候補遺伝子のリストから、個別にその遺伝子の機能を調べ、シェディングに関るかどうかを調査中である。

報告書

(3件)
  • 2007 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2006 実績報告書
  • 研究成果

    (16件)

すべて 2007 2006 その他

すべて 雑誌論文 (12件) (うち査読あり 4件) 学会発表 (2件) 備考 (2件)

  • [雑誌論文] Diphtheria toxin mutant CRM197 possesses weak EF2-ADP-ribosyl activity that potentiates its anti-tumorigenic activity.2007

    • 著者名/発表者名
      Kageyama, T, et. al.
    • 雑誌名

      J. Biochem. 142

      ページ: 95-104

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Parasporin-1, a novel cytotoxic protein from Bacillus thuringiensis, induces Ca2+ influx and a sustained elevation of the cytoplasmic Ca2+ concentration in toxin-sensitive cells.2007

    • 著者名/発表者名
      Katayama, H., et. al.
    • 雑誌名

      J. Biol. Chem. 282

      ページ: 7742-7752

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書 2007 研究成果報告書概要
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Sulfated glycosaminoglycans are necessary for Nodal signal transmission from the node to the left lateral plate in the mouse embryo.2007

    • 著者名/発表者名
      Oki, S., et. al.
    • 雑誌名

      Development 134

      ページ: 3893-3904

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書 2007 研究成果報告書概要
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Diphtheria toxin mutant CRM197 possesses weak EF2-ADP-ribosyl activity that potentiates its anti-tumorigenic activity2007

    • 著者名/発表者名
      Kageyama, T., Ohishi, M., Miyamoto, S., Mizushima, H., Iwamoto, R., Mekada, E
    • 雑誌名

      J. Biochem 142

      ページ: 95-104

    • NAID

      10020098014

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Parasporin-1, a novel cytotoxic protein from Bacillus thuringiensis, induces Ca2+ influx and a sustained elevation of the cytoplasmic Ca2+ concentration in toxin-sensitive cells2007

    • 著者名/発表者名
      Katayama, H., Kusaka, Y., Yokota, H., Akao, T., Kojima, M., Nakamura, O., Mekada, E., Mizuki., E
    • 雑誌名

      J. Biol. Chem 282

      ページ: 7742-7752

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Sulfated glycosaminoglycans are necessary for Nodal signal transmission from the node to the left lateral plate in the mouse embryo2007

    • 著者名/発表者名
      Oki, S., Hashimoto, R., Okui, Y, Shen, M., M., Mekada, E., Otani, H., Saijoh, Y., Hamada, H
    • 雑誌名

      Development 134

      ページ: 3893-3904

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Diphtheria toxin mutant CRM197 possesses weak EF2-ADP-ribosyl activity that potentiates its anti-tumorigenic activity.2007

    • 著者名/発表者名
      Kageyama, T., et. al.
    • 雑誌名

      J. Biochem. 142

      ページ: 95-104

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Parasporin-1,a novel cytotoxic protein from Bacillus thuringiensis,induces Ca2+ influx and a sustained elevation of the cytoplasmic Ca2+ concentration in toxin-sensitive cells.2007

    • 著者名/発表者名
      Katayama, H., Kusaka., Yokota, H., Akao, T., Kojima, M., Nakamura, O., Mekada, E., Mizuki,E.
    • 雑誌名

      J.Biol.Chem. (In press)

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] FRA1 is a determinant for the difference in RAS-induced transformation between human and rat fibroblasts.2006

    • 著者名/発表者名
      Kakumoto, K., Sasai, K., Sukezane, T., Oneyama, C., Ishimaru, S., Shibutani, K., Mizushima, H., Mekada, E., Hanafusa, H., Akagi,T.
    • 雑誌名

      Proc.Natl.Acad.Sci. USA103

      ページ: 5490-5495

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Heparin-binding EGF-like growth factor as a novel targeting molecule for cancer therapy.2006

    • 著者名/発表者名
      Miyamoto, S., Yagi, H., Yotsumoto, F., Kawarabayashi, T., Mekada,E.
    • 雑誌名

      Cancer Sci. 97

      ページ: 341-347

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] ErbB and HB-EGF signaling in heart development and function.2006

    • 著者名/発表者名
      Iwamoto, R., Mekada, E.
    • 雑誌名

      Cell Struct. Funct. 31

      ページ: 1-14

    • NAID

      130004137503

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Cytoplasmic Domain Phosphorylation of Heparon-Binding EGF-like Growth Factor.2006

    • 著者名/発表者名
      Wang, X., Mizushima, H., Adachi, S., Ohishi, M., Iwamoto, R., Mekada,E.
    • 雑誌名

      Cell Struct.Funct. 31

      ページ: 15-27

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [学会発表] HB-EGF:新しいがんの分子標的2007

    • 著者名/発表者名
      目加田英輔
    • 学会等名
      日本癌学会
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      2007-10-04
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書 2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] HB-EGF as a new target molecule for cancer therapy2007

    • 著者名/発表者名
      Eisuke, Mekada
    • 学会等名
      66th Annual Meeting of the Japanese Cancer Association
    • 発表場所
      Yokohama
    • 年月日
      2007-10-04
    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [備考] 「研究成果報告書概要(和文)」より

    • URL

      http://cell-biology.biken.osaka-u.ac.jp/

    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [備考]

    • URL

      http://cell-biology.biken.osaka-u.ac.jp/

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書

URL: 

公開日: 2006-04-01   更新日: 2016-04-21  

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