EBウイルスゲノム複製に伴う宿主細胞応答の解析

• 研究課題/領域番号: 18390147
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 愛知県がんセンター研究
• 研究代表者: 鶴見 達也 愛知県がんセンター(研究所), 腫瘍ウイルス学部, 部長 (90172072)
• 研究分担者: 磯村 寛樹 愛知県がんセンター(研究所), 腫瘍ウイルス学部, 主任研究員 (20294415) ; 岩堀 聡子 愛知県がんセンター(研究所), 腫瘍ウイルス学部, リサーチレジデント (80416164) ; 中山 早苗 愛知県がんセンター(研究所), 腫瘍ウイルス学部, リサーチレジデント (80443456)
• 研究期間 (年度): 2006 – 2007
• 研究課題ステータス: 完了 (2007年度)
• 配分額: 16,710千円 (直接経費: 14,700千円、間接経費: 2,010千円); 2007年度: 8,710千円 (直接経費: 6,700千円、間接経費: 2,010千円); 2006年度: 8,000千円 (直接経費: 8,000千円)
• キーワード: EBウイルス / MCM / リン酸化 / ウイルスキナーゼ / p53 / ユビキチン / EBV / DNA損傷 / MCM複合体 / ミスマッチ修復

研究概要

EBV溶解感染を誘導すると宿主細胞内ではEBVゲノムは100倍から1000倍増幅複製される。このウイルスDNA合成を宿主細胞はDNA損傷即ち異常DNAとみなしATM依存的DNA損傷チェックポイント経路を活性化することを明らかにしてきた。しかしATM依存的DNA損傷チェックポイント経路の活性化はp53の活性化をおこすが、p53及びp53の下流のp21、MDM2の発現量の増加はなく、p53の下流の経路は活性化されていなかった。これはウイルスBZLF1蛋白質がp53をユビキチン化しプロテアソーム依存的に分解することで細胞周期停止や細胞死の誘導をおさえていることがわかった。EBV感染細胞内において、p53は潜伏感染期ではMDM2によって制御されるのに対し、溶解感染期では、MDM2とは別の機構、BZLF1蛋白質自身にはユビキチン活性は無いことから、おそらくBZLF1蛋白質に付随したE3リガーゼ複合体によって制御されていることが明らかとなった。
またこれまでEBV溶解感染を誘導した細胞はS期様環境を維持したまま宿主DNA複製が抑制され細胞周期停止を引き起こすことを明らかにしてきた。その分子機構の一つの機序として溶解感染を誘導すると染色体複製開始及び複製伸長に関与するMCM複合体のリン酸化(特にMCM4)がおきることがわかった。MCM4-6-7から構成される6量体の持つDNAヘリカーゼ活性はBGLF4蛋白質共存在化では著しく抑制されることから、EBV溶解感染期にはCDK2およびBGLF4蛋白質がMCM複合体をリン酸化しMCM複合体のヘリカーゼ活性を不活化することが、宿旋染色体DNAの再複製開始および複製伸長を阻害する一つの機構であることが示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] A cis element between the TATA Box and the transcription start site of the major immediate-early promoter of human cytomegalovirus determines efficiency of viral replication. (2008)
  • 著者名/発表者名: Isomura, H., Stinski, MF., Kudoh, A., Nakayama, S., Murata, T., Sato, Y., Iwahori, S. and Tsurumi, T.
  • 雑誌名: J Virol 82 ページ: 849-858
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Noncanonical TATA Sequence in the UL44 Late Promoter of Human Cytomegalovirus is required for the accumulation of late viral transcripts. (2008)
  • 著者名/発表者名: Isomura, H., Stinski, MF., Kudoh, A., Murata, T., Nakayama, S., Sato, Y., Iwahori, S. and Tsurumi, T.
  • 雑誌名: J virol. 82 ページ: 1638-1646
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] A cis element between the TATA Box and the transcription start site of the major immediate-early promoter of human cytomegalovirus determines efficiency of viral replication. (2008)
  • 著者名/発表者名: Isomura H, et. al.
  • 雑誌名: J.Virol. 82 ページ: 849-858
  • 査読あり
• [雑誌論文] The late promoter of the human cytomegalovirus viral DNA polymerase processivity factor has an impact on delayed early and late viral gene products but not on viral DNA synthesis. (2007)
  • 著者名/発表者名: Isomura H., et. al.
  • 雑誌名: J.Virol. 81 ページ: 6341-6247
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] The late promoter of the human cytomegalovirus viral DNA polymerase processivity factor has an impact on delayed early and late viral gene products but not on viral DNA synthesis. (2007)
  • 著者名/発表者名: Isomura, H., Stinski, MF., Kudoh, A., Nakayama, S., Iwahori, S., Sato, Y. and Tsurumi, T.
  • 雑誌名: J Virol 81 ページ: 6241-6247
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Enhanced phosphorylation of transcription factor Sp1 dependent on Ataxia Telangiectasia-Mutated(ATM) in response to herpes simplex Vvrus Type I infection. (2007)
  • 著者名/発表者名: Iwahori, S., Shirata, N., Kawaguchi, Y., Weller, SK., Sato., Y., Kudoh, A., Nakayama, S., Isomura, H. and Tsurumi T.
  • 雑誌名: J Virol 81 ページ: 9653-9664
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Oncolytic virotherapy with an HSV amplicon vector expressing granulocyte-macrophage colony stimulating factor using the replication-competent HSV type 1 mutant HF10 as a helper virus. (2007)
  • 著者名/発表者名: Kohno, SI., Luo, C., Nawa, A., Fujimoto, Y., Watanabe, D., Goshima, F., Tsurumi, T. and Nishiyama, Y.
  • 雑誌名: Cancer Gene Ther. 14 ページ: 918-926
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Enhanced phosphorylation of transcription factor Spl dependent on Ataxia Telangiectasia-Mutated(ATM)in response to herpes simplex Vvrus Type I infection. (2007)
  • 著者名/発表者名: Iwahori S, et. al.
  • 雑誌名: J.Virol. 81 ページ: 9653-9664
  • 査読あり
• [雑誌論文] The late promoter of the human cytomegalovirus viral DNA polymerase processivity factor has an impact on delayed early and late viral gene products but not on viral DNA synthesis. (2007)
  • 著者名/発表者名: Isomura H, et. al.
  • 雑誌名: J.Virol. 81 ページ: 6341-6247
  • 査読あり
• [雑誌論文] Paclitaxel-2'-Ethylcarbonate Prodrug Can Circumvent P-glycoprotein-mediated Cellular Efflux to Increase Drug Cytotoxicity. (2007)
  • 著者名/発表者名: Tanino T et al.
  • 雑誌名: Pharm Res. (In press)
• [雑誌論文] Postreplicative Mismatch Repair Factors are recruited to Epstein-Barr Virus Replication Compartments. (2006)
  • 著者名/発表者名: Daikoku T., et. al.
  • 雑誌名: J.Biol.Chem 281 ページ: 11422-11430
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phosphorylation of MCM4 at sites inactivating DNA helicase activity of the MCM4-6-7 complex during epstein-barr virus productive replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kudoh A., et. al.
  • 雑誌名: J.Virol. 80 ページ: 10064-10072
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Postreplicative Mismatch Repair Factors are recruited to Epstein-Barr Virus Replication Compartments. (2006)
  • 著者名/発表者名: Daikoku T, Kudoh A, Sugaya Y, Iwahori S. Shirata N, Isomura H and Tsurumi T.
  • 雑誌名: J Biol Chem. 281 ページ: 11422-11430
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Phosphorylation of MCM4 at sites inactivating DNA helicase activity of the MCM4-6-7 complex during epstein-barr virus productive replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kudoh, A., Daikoku, T., Ishimi, Y., Kawaguchi, Y., Shirata, N., Iwahori. S., Isomura. H. and Tsurumi, T.
  • 雑誌名: J. Virol. 80 ページ: 10064-10072
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Establishment of a novel foreign gene delivery system combining an HSV amplicon with an attenuated replication-competent virus, HSV-1 HF10. (2006)
  • 著者名/発表者名: Zhang, L., Daikoku, T., Ohtake, K., Ohtsuka, J., Nawa, A., Kudoh, A., Iwahori, S., Isomura, H., Nishiyama, Y., and Tsurumi. T.
  • 雑誌名: J. Virol. Methods. 137 ページ: 177-183
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Immortalization of Epstein-Barr virus-negative human B lymphocytes with minimal chromosomal instability. (2006)
  • 著者名/発表者名: Yamashita, Y., Tsurumi. T., Mori, Y., and Kiyono, T.
  • 雑誌名: Pathol Int. 56 ページ: 659-667
  • NAID: 10018400126
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Postreplicative mismatch repair factors are recruited to epstein-barrvirus replication compartments. (2006)
  • 著者名/発表者名: Daikoku et al.
  • 雑誌名: J.Biol.Chem 281 ページ: 11422-11430
• [雑誌論文] Phosphorylation of MCM4 at sites inactivating DNA helicase activity of the MCM4-MCM6-MCM7 complex during Epstein-Barr virus productive replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kudoh et al.
  • 雑誌名: J.Virol. 80 ページ: 10064-10072
• [雑誌論文] Establishment of a novel foreign gene delivery system combining an HSV amplicon with an attenuated replication-competent virus, HSV-1HF10. (2006)
  • 著者名/発表者名: Zhang et al.
  • 雑誌名: J.Virol.Method. 137 ページ: 177-183
• [学会発表] The late promoter of the human cytomegalovirus viral DNA polymerase processivity factor has an impact on delayed early and late viral gene products but not on viral DNA synthesis. (2007)
  • 著者名/発表者名: Isomura H, Stinski MF, Kudoh A, Nakayama S, Iwahon S, Sato Y, Tsurumi T
  • 学会等名: 32nd Herpesvirus Workshop
  • 発表場所: Asheville, USA
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] Postreplicative mismatch repair factors are recruited to Epstein-Barr virus replication compartment. (2006)
  • 著者名/発表者名: Tsurumi T, et. al.
  • 学会等名: The 12th Symposium of the International Association for Research on Epstein-Barr and Associated Diseases
  • 発表場所: 米国 ボストン
  • 年月日: 2006-07-10
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] Postreplicative mismatch repair factors are recruited to Epstein-Barr virus replication compartment. (2006)
  • 著者名/発表者名: Tsurumi T, Kudoh A, Daikoku T
  • 学会等名: The 12th Symposium of the International Association for Research on Epstein-Barr and Associated Diseases
  • 発表場所: Boston, USA
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] Phosphorylation of MCM4 at sites inactivating DNA helicase activity of the MCM4-6-7 complex during Epstein-Barr virus productive replication. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kudoh A, Tsurumi T
  • 学会等名: The 12th Symposium of the International Association for Research on Epstem-Barr and Associated Diseases
  • 発表場所: Boston, USA
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] A cis-element downstream of TATA box in the HCMV major IE promoter stabilizes the TBP-TFIIB-DNA complex for efficient RNA transcription and splicing. (2006)
  • 著者名/発表者名: Isomura H, Stinski MF, Kudoh A, Iwahori S, Shirata N, Daikoku T, Tsurumi T
  • 学会等名: 31st Herpesvirus Workshop
  • 発表場所: Seattle, USA
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [図書] ウイルス研究の現在と展望:DNAウイルスゲノム複製と宿主DNA損傷応答 (2007)
  • 著者名/発表者名: 鶴見達也
  • 出版者: 共立出版
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [産業財産権] 弱毒化組換えヒトサイトメガロウイルス (2006)
  • 発明者名: 鶴見達也
  • 権利者名: 愛知県
  • 産業財産権番号: 2006-277793
  • 出願年月日: 2006
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より