| 研究課題/領域番号 |
18570053
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
形態・構造
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| 研究機関 | 千葉大学 |
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研究代表者 |
阿部 洋志 千葉大学, 大学院・融合科学研究科, 准教授 (00222662)
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| 研究期間 (年度) |
2006 – 2007
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| 研究課題ステータス |
完了 (2007年度)
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| 配分額 *注記 |
4,110千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 510千円)
2007年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
2006年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
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| キーワード | 発生・分化 / 嚢胚形成運動 / アクチン調節蛋白質 / コフィリン / slingshot / リン酸化 / フォスファターゼ / シグナル伝達 / アクチン線維 |
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| 研究概要 |
嚢胚形成運動開始時の細胞の運動能の獲得とコフィリンのリン酸化制御の関連を解析するために、嚢胚形成運動開始時の胚を各胚葉に分離して、それぞれの胚葉におけるコフィリンのリン酸化状態を調べた。その結果、どの胚葉でもコフィリンのリン酸化状態はその直前のステージのものに比べ顕著に増大しており、細胞の運動性の獲得とコフィリンのリン酸化レベルの間には正の相関があることが確かめられた。特に、中胚葉におけるリン酸化の上昇が著しく、これは外胚葉であるアニマルキャップを中胚葉誘導することによっても確認された。
次に、コフィリンのアクチン結合部位変異体(△A)、あるいはリン酸化されたコフィリンを脱リン酸化して活性化するコフィリン特異的フォスファターゼであるslingshot(XSSH)のドミナントネガティブ体を胚細胞内で発現させた。その結果、外胚葉のepibolyや中胚葉の収束的伸長、さらに内胚葉の運動に阻害が観察されることから、これら各胚葉の運動にはコフィリンの脱リン酸化による調節機構が深く関与することが推測された。
さらに、XSSH自身のリン酸化調節機構の意義を明らかにするため、SSHのリン酸化のアッセイ系を確立し、SSHのTailドメインのN端側に1カ所、中央領域に2カ所、そしてC端側に1カ所、合計4カ所のリン酸化部位が存在することを突き止めた。XSSH自身のフォスファターゼ活性はTailドメインがリン酸化されても変化しないことも明らかとなり、XSSHのリン酸化は、細胞内の局在性の変化などに関与していることが推測された。そして、Tai1ドメインのみを胚内で発現させ、内在性のXSSHのリン酸化調節を攪乱すると、著しい嚢胚形成運動の阻害を引き起こすことが見出された。したがって、XSSHのリン酸化に、正常な嚢胚形成運動に極めて重要であることが強く示唆された。
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