| 研究課題/領域番号 |
18590053
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
生物系薬学
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| 研究機関 | 立命館大学 |
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研究代表者 |
川嵜 伸子 立命館大学, 総合理工学研究機構, 教授 (70077676)
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| 研究分担者 |
川嵜 敏祐 立命館大学, COE推進機構, 教授 (50025706)
マー ブルース ヨン (MA Bruce Yong) 立命館大学, COE推進機構, 准教授 (00378788)
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| 研究期間 (年度) |
2006 – 2007
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| 研究課題ステータス |
完了 (2007年度)
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| 配分額 *注記 |
3,920千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 420千円)
2007年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
2006年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
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| キーワード | マンナン結合タンパク質 / レクチン / ヒト結腸癌細胞 / 糖鎖リガンド / 血液型ルイス抗原 / ポリラクトサミン / CD26 / ジペプチジルペプチダーゼIV / 血清レクチン / 抗腫瘍活性 |
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| 研究概要 |
血清マンナン結合タンパク質(mannan-binding protein;MBP)はマンノース、N-アセチルグルコサミン、フコースに特異的なCa^(2+)依存性レクチンであり、ヒト結腸癌由来SW1116細胞に対し、増殖抑制作用をもつ。これまで報告者らはこの抗腫瘍活性に関与すると考えられる癌細胞上の内在性MBPリガンドオリゴ糖鎖がルイスAのタンデムリピートをもつ、非常に特徴的な構造の長鎖ポリラクトサミン様糖鎖であることを明らかにしている。本研究では、この新規のN-グリコシド型MBPリガンドオリゴ糖鎖の主要なキャリヤータンパク質を同定し、そのタンパク質分子上の糖鎖のうち、MBPに高親和性で結合する糖鎖の構造の特徴、およびリガンド糖鎖の付加部位を明らかにした。
1.SW1116細胞膜画分を、AAL-、抗ルイスb抗体-、MBP-カラムにかけ、MBPリガンド糖タンパク質(MLGP)を単離した。MLGPのうち、主要な120kDaを示すタンパク質は、質量(MS)分析により、癌関連糖タンパク質であるCD26(Dipeptidyl peptidaseIV(DPPIV))であることを明らかにした。
2.MLGP画分より抗ヒトCD26モノクロール抗体カラムを用いて、CD26を単離精製した。
3.精製CD26分子をN-グリカナーゼ消化し、遊離した糖鎖をMALDI/MS分析した結果、MBPの特徴的なルイスA繰り返し構造のオリゴ糖鎖がCD26分子上に載っていることが明らかとなった。
4.CD26をキモトリプシン消化し、MBPカラムにより、MBP結合画分と非結合画分に分画した。それぞれの画分のペプチド部分と糖鎖部分についてMS分析をした。9カ所の潜在的N-グリコシド型糖鎖付加部位のうち、7箇所に糖鎖が付加していることをわかった。また、MBPに結合する糖鎖画分のMS分析により、MBPに高親和性をもって結合するリガンド糖鎖として、ルイスA糖鎖の4個以上のタンデムリピート構造が必要であることを明らかにした。
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