研究課題
基盤研究(C)
タンパク質中のアスパラギンやアスパラギン酸残基は、異性化やラセミ化を起こしやすく、劣化に伴いイソアスパラギン酸やD-アスパラギン酸に変換される。一方、異性化やラセミ化を起こしたタンパク質の修復酵素として、protein isoaspartyl/D-aspartyl methyltransferase(PIMT)が知られている。本酵素の欠損マウスは脳の肥大化および致死性の癲癇発作を生じる事などが報告されており大変興味深い。本研究では、まずPIMTの生理的役割を解明する目的で、新たなPIMTの活性測定系の開発を行い、細胞レベルでのPIMT活性が測定可能である簡便なアッセイ系の確立に成功している。現在は、本活性測定系で活性を測定することにより、どのような刺激によりPIMT活性が変動するか解析である。さらにPIMTの発現調節機構を解明する目的で、ヒト染色体DNAよりPIMTプロモーター領域をクローニングし、ルシフェラーゼレポーター遺伝子に組み込むことによりPIMTプロモーターの活性測定系を確立し、本測定系を用いてプロモーター領域の解析を行った。その結果、転写の活性化に必須な領域の同定に成功した。そこで今後は、ゲルシフトアッセイやDNAアフィニティークロマトグラフィーを用いた精製等を行い、これら領域に結合する転写因子の同定に向け解析を進めていく予定である。また別に、PIMTsiRNA発現ベクターを構築し、それを用いてPIMT発現抑制株を樹立し解析した。その結果、PIMT発現抑制株ではコントロール細胞に比較し成長因子刺激によるMAPKカスケードの活性化が異常亢進することを見出しており、PIMTは細胞内シグナル伝達系が正常に機能するために重要な役割を果たしていることが示唆されてきている。現在は、その異常亢進機構解明に向け更なる解析を行っている段階にある。
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