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遺伝子プロモーターメチル化細胞を可視化するin situ MSP法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 18590330
研究種目

基盤研究(C)

配分区分補助金
応募区分一般
研究分野 人体病理学
研究機関山口大学

研究代表者

河内 茂人  山口大学, 大学院・医学系研究科, 准教授 (80284511)

研究分担者 佐々木 功典  山口大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (80116722)
研究期間 (年度) 2006 – 2007
研究課題ステータス 完了 (2007年度)
配分額 *注記
2,070千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 270千円)
2007年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2006年度: 900千円 (直接経費: 900千円)
キーワードin situ MSP法 / エピジェネティクス / CpG領域シトシンメチル化 / in situ PCR法 / methylatio-specific PCR / gene silencing / 遺伝子CpGメチル化
研究概要

エピジェネティクな遺伝子発現調節機構のひとつである遺伝子プロモーターCpG領域シトシンメチル化は、個体発生、発癌や疾患罹患に関する個体差等の、医学上の多岐にわたる問題と密接に関連している。今回、われわれが科学研究費助成金の交付を受けた研究テーマは、「特定の遺伝子プロモーター領域にCpGメチル化を持つ個々の細胞を、組織切片上で標識可視化する技術(in situ MSP法)の開発」であった。当初、われわれの想定したin situ MSP法は、以下の行程で構成されるものであった。(1)固定薄切された組織切片あるいは塗抹細胞をスライドガラス上発貼付し、タンパク分解酵素発よる細胞核DNAの形骸化処理。(2)亜硫酸ナトリウム発よるシトシン⇒ウラシル置換反応。(メチル化シトシンの場合は亜硫酸ナトリウム発よる変化を受けない。)(3)亜硫酸ナトリウム処理済みの組織切片上で、通常の液相MSP法で使用するメチル化特異的および非メチル化特異的プライマーを用いて、標準的なin situ PCR間接法の手法発順じたDNAフラグメントの増幅、標識反応、CpGメチル化細胞同定の施行。平成18年度の助成期間中発in situ MSP法の開発を完了する予定であったが、当初の予想以上発非特異的標識がみられ改善の必要性があると考えられた。解決策として固定、蛋白分解酵素処理の改変、PCRプライマーの設計見直し、in situ PCR法の条件改良等を行った。以上の再検討の結果から非特異的標識の原因としては、(3)のin situ PCR法発よるものが最も重要と考えられたので、平成19年ではin situ PCR法の条件を見直し、同年度半ば発は基本的手技の確立を達成した。この成果は平成20年5月の日本病理学会総会で発表の予定である。また、確立したin situ MSP法の詳細は学術論文として執筆中である。手技の確立に当初の予想以上発時間と経費を要したin situ MSP法であるが、今後は本法の有用性を実際の研究発用いて実証する。

報告書

(3件)
  • 2007 実績報告書   研究成果報告書概要
  • 2006 実績報告書
  • 研究成果

    (16件)

すべて 2008 2007 2006 その他

すべて 雑誌論文 (10件) (うち査読あり 6件) 学会発表 (3件) 図書 (1件) 備考 (2件)

  • [雑誌論文] Influence of cytological stains on comparative genomic hybridization analysis for DNA extracted from cytological smears.2007

    • 著者名/発表者名
      Kawauchi S, et. al.
    • 雑誌名

      Oncology Reports 18

      ページ: 1219-1223

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Chromosomal aberrations detected by comparative genomic hybridization predict outcome in patients with colorectal carcinoma.2007

    • 著者名/発表者名
      Liu XP, et. al.
    • 雑誌名

      Oncology Reports 17

      ページ: 261-267

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Influence of cytological stains on comparative genomic hybridization analysis for DNA extracted from cytological smears2007

    • 著者名/発表者名
      Kawauchi, S, Sugimoto S, Liu, XP, Ikemoto K, Furuya, T, Takahashi, M, Sasaki, K
    • 雑誌名

      Oncology Reports 18-5

      ページ: 1219-1223

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Chromosomal aberrations detected by comparative genomic hybridization predict outcome in patients with colorectal carcinoma2007

    • 著者名/発表者名
      Liu, XP, Kawauchi, S, Oga, A, Sato, T, Ikemoto, K, Ikeda, E, Sasaki, K
    • 雑誌名

      Oncology Reports 17

      ページ: 261-267

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [雑誌論文] Influence of cytological stains on comparative genomic hybridization analysis for DNA extracted from cytological smears2007

    • 著者名/発表者名
      Kawauchi S, et. al.
    • 雑誌名

      Oncology Reports 18

      ページ: 1219-1223

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Gain of 5p15.33 is associated with progression of bladder cancer2007

    • 著者名/発表者名
      Yamamoto Y, et. al.
    • 雑誌名

      Oncology 72

      ページ: 132-138

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Chromosomal aberrations detected by comparative genomic hybridization predict outcome in patients with colorectal carcinoma2007

    • 著者名/発表者名
      Liu XP,and et. al.
    • 雑誌名

      Oncology Reports 17

      ページ: 261-267

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Significance of cyclin E and p27 expression in malignant ovarian germ cell tumors : correlation with the cell proliferation activity and clinicopathologic features.2007

    • 著者名/発表者名
      Kawauchi S, et al.
    • 雑誌名

      Oncology Reports 16・5

      ページ: 1029-1033

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] Significance of cyclin E and p27 expression in malignant ovarian germ cell tumors: correlation with the cell proliferation activity and clinicopat hologic features.2006

    • 著者名/発表者名
      Kawauchi S, et. al.
    • 雑誌名

      Oncology Reports 16

      ページ: 1029-1033

    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Significance of cyclin E and p27 expression in malignant ovarian germ cell tumors : correlation with the cell proliferation activity and clinicopathologic features2006

    • 著者名/発表者名
      Kawauchi, S, Yamamoto, Y, Uchida, K, Chochi, Y, Kondo T, Oga, A, Sasaki, K
    • 雑誌名

      Oncology Reports 16-5

      ページ: 1029-1033

    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] In situ MSP法によるp16遺伝子プロモーター領域シトシンメチル化細胞の可視化2008

    • 著者名/発表者名
      河内茂人, 他
    • 学会等名
      第97回日本病理学会総会
    • 発表場所
      金沢
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [学会発表] Significance of dual-color FISH with 9p21 and chromosome 9 centromeric probes for prediction of recurrent baldder cancer2007

    • 著者名/発表者名
      河内 茂人, その他
    • 学会等名
      第66回日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      2007-10-03
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] In situ methylation-specific polymerase chain reaction for detecting cells bearing p16 gene promoter CpG islands hypermethylation on a tissue section2007

    • 著者名/発表者名
      Kawauchi, S, Suehiro, Y, Chochi, Y, Kondo, T, Oga, A, Sasaki, K
    • 学会等名
      97th Japanese Society of Pathology
    • 発表場所
      Kanazawa, JPN.
    • 説明
      「研究成果報告書概要(欧文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [図書] 子宮腫瘍病理アトラス2007

    • 著者名/発表者名
      本山 悌一, 他
    • 総ページ数
      325
    • 出版者
      文光堂
    • 説明
      「研究成果報告書概要(和文)」より
    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [備考] 「研究成果報告書概要(和文)」より

    • URL

      http://ds.cc.yamaguchi-u.ac.jp/~2byouri/index.html

    • 関連する報告書
      2007 研究成果報告書概要
  • [備考]

    • URL

      http://ds.cc.yamaguchi-u.ac.jp/~2byouri/framepage2.html

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書

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公開日: 2006-04-01   更新日: 2016-04-21  

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