膵胆道癌細胞における抗アポトーシス遺伝子発現調節機構の解析と分子標的治療への応用

• 研究課題/領域番号: 18590747
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器内科学
• 研究機関: 慶應義塾大学
• 研究代表者: 高石 官均 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (80286468)
• 研究分担者: 樋口 肇 慶應義塾大学, 医学部, 助教 (20306682)
• 研究期間 (年度): 2006 – 2007
• 研究課題ステータス: 完了 (2007年度)
• 配分額: 3,590千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 390千円); 2007年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2006年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
• キーワード: Mcl-1 / アポトーシス / siRNA

研究概要

消化器癌細胞におけるアポトーシス感受性規定分子を検索し、Bcl-2ファミリー蛋白であるmyeloid cell leukemia-1(Mcl-1)が抗癌剤抵抗性克服のための標的分子となりうるか否かを検討した。胃癌細胞株(6種)を用い、Mcl-1発現レベルとアポトーシス感受性の相関を検討した。
Mcl-1 mRNA発現レベルはreal time PCR法により、Mcl-1蛋白発現レベルはwestern blot法により解析した。アポトーシス感受性感受性解析は、annexin V染色法、MTS assay、DAPI染色による蛍光顕微鏡観察を行った。アポトーシスの誘導は、抗癌剤(5-fluorouracil,cisplatin)、TNF-related apoptosis-inducing ligand(TRAIL)を用いた。胃癌細胞株において、Mcl-1発現レベルとアポトーシス感受性の間に相関がみられた。Mcl-1発現抑制を誘導するため、ヘアピン型siRNA(shRNA)発現adenovirus vectorを作成し、高い遺伝子抑制効率を確認した。抗Mcl-1 shRNAベクターにより、著しいアポトーシス感受性増強作用が確認された。さらに、胃癌細胞株MKN-45を用いて、cancer stem cell-enriched fractionであるside population(SP)分画を分離したところ、SP分画においてより高いMcl-1の発現を認めた。さらに、抗Mcl-1 shRNAによりSP細胞のapoptosis感受性は増強された。これらの検討結果より、胃癌細胞に対する治療抵抗性克服のための分子標的治療において、Mcl-1が重要な標的分子となると考えられた。

研究成果

• [学会発表] Transforming growth factor(TGF)-bate induces pancreatic cancer cell invasion and epithelial to mesenchymal(EMT)in side-population(SP)cells but not in non SP cells (2007)
  • 著者名/発表者名: Kabashima A, Higuchi H, Matsuzaki Y, Hasegawa G, Kuriyama N, Takaishi H, Izumiya M, Iizuka H, Sakai G, and Hibi T.
  • 学会等名: 2007 AACR Annual Meeting
  • 発表場所: Los Angeles,CA
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] Mcl-1 depletion sensitizes the apoptosis of gastrointestinal cancer cells mediated by anti-cancer drugs (2007)
  • 著者名/発表者名: Iizuka H, Higuchi H, Sumimoto H, Kabashima A, Kuriyama N, Sakai G, Izumiya M, Ymagishi Y, Takaishi H, Kawakami Y, Mizoguchi H, and Hibi T.
  • 学会等名: 2007 AACR Annual Meeting
  • 発表場所: Los Angeles,CA
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] Transforming growth factor (TGF)-bate induces pancreatic cancer cell invasion and epithelial to mesenchymal (EMT) in side-population (SP) cells but not in non SP cells. (2007)
  • 著者名/発表者名: Kabashima, A., Higuchi, H., Matsuzaki, Y., Hasegawa, G., Kuriyama, N., Takaishi, H., Izumiya, M., Iizuka, H., Sakai, G., Hibi, T
  • 学会等名: 2007 AACR Annual Meeting
  • 発表場所: Los Angeles, CA
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] Mcl-1 depletion sensitizes the apoptosis of gastrointestinal cancer cells mediated by anti-cancer drugs. (2007)
  • 著者名/発表者名: Iizuka, H., Higuchi, H., Sumimoto, H., Kabashima, A., Kuriyama, N., Sakai, G., Izumiya, M., Ymagishi, Y., Takaishi, H., Kawakami, Y., Mizoguchi, H., Hibi, T
  • 学会等名: 2007 AACR Annual Meeting
  • 発表場所: Los Angeles, CA
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より