研究課題
基盤研究(C)
心筋細胞分化の分子機序の解明と、選択的にES細胞を心筋細胞へと分化制御する因子の同定とその機能解析を目的に以下の研究を行った。1.cDNAライブラリーを発現する非増殖性組み換えレトロウイルスの作製。P19CL6細胞を用い心筋細胞への分化誘導を行い、分化誘導後4〜7日の細胞より抽出したmRNAからcDNAを合成し、レトロウイルスベクターに組み込みcDNAライブラリーを作製し、非増殖性組み換えレトロウイルスを作製した。2.未分化状態のES細胞を分化誘導する因子の探索。心筋細胞へと分化するとGFP遺伝子を発現するES細胞を用い、作製したcDNAライブラリーをレトロウイルスベクターにより遺伝子導入し、心筋細胞へと分化しGFPを発現した細胞群より染色体DNAを抽出した。その染色体DNAを用い、レトロウイルスベクターを認識するベクタープライマーを用いたPCRによりcDNAを回収し、その塩基配列をシークエンサーにより決定し、G protein beta polypeptide 2 like 1(Gnb211,Rack1),oxidase assembly 1-like(0xa11),glutaredoxin 5 homolog(Glrx5),aurora kinase A interacting protein 1(Aurkaipl)などを候補遺伝子として得た。3.同定した候補遺伝子の機能解析。同定した候補遺伝子のfull-length cDNAをレトロウイルスベクターによりES細胞に発現させることにより、これらの遺伝子の心筋細胞への分化誘導能を検討しており、本研究を進めることにより、心筋細胞分化の分子機序の解明と、選択的に心筋細胞に分化誘導する方法の開発につながると考える。
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