| 研究概要 |
腎におけるレニン-アンジオテンシン系は,血圧循環調節や水・電解質代謝の制御および高血圧発症・維持のために重要である.よって,本年度は主に腎の培養細胞系におけるATRAPの細胞レベルでの機能についての検討をおこなった.まず,アデノウイルス発現ベクターを用いて高効率ATRAP発現ベクターの作製をおこなうとともに,内在性ATRAP遺伝子発現をノックダウンさせるsiRNA-ATRAPを作製した.そして,ATRAPの局所発現解析実験においてATRAPの内在性発現が認められた細胞のうち,糸球体メサンギウム細胞および尿細管細胞の腎細胞培養系において、wild type ATRAPを過剰発現あるいはsiRNA-ATRAPを遺伝子導入することにより細胞内でのATRAP発現を増加あるいは少させて,receptor binding assay,細胞免疫染色法,蛋白質リン酸化酵素活性測定,Na+current測定,promoter assay,DNA/蛋白質合成能の測定などをおこなった.また,アンジオテンシンII刺あるいは生体での圧負荷を細胞レベルでsimulateする周期的伸展刺激が腎細胞に与える影響に対るATRAPの作用について検討を加えるとともに,これら刺激がAT1受容体とATRAPとの共局在性に与える影響についても検討した.これらの結果,ATRAPはAT1受容体刺激による尿細管細胞でのNa+再吸や尿細管細胞の酸化ストレスなどを顕著に抑制することを明らかにした.
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