| 研究課題/領域番号 |
18590996
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
代謝学
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| 研究機関 | 熊本大学 |
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研究代表者 |
古川 昇 熊本大学, 医学部附属病院, 医員 (90335795)
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| 研究分担者 |
水流添 覚 熊本大学, 医学部附属病院, 助教 (50398202)
近藤 龍也 熊本大学, 医学部附属病院, 医員 (70398204)
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| 研究期間 (年度) |
2006 – 2007
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| 研究課題ステータス |
完了 (2007年度)
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| 配分額 *注記 |
3,950千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 450千円)
2007年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
2006年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
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| キーワード | Rho-Kinase / インスリン遺伝子 / 膵β細胞 / プロモーター / MIN6 / Y-27632 / Rho-kinase |
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| 研究概要 |
本研究の目的は膵β細胞におけるインスリン合成分泌におけるRho-kinaseの役割を明らかにすることである。まず膵β細胞におけるインスリン合成に対するRho-kinaseの影響を検討するため、マウス由来の膵β細胞株であるMIN6細胞に、ヒトインスリン遺伝子プロモーターを挿入したルシフェラーゼベクターを導入し、Rho-kinase特異的阻害剤であるY-27632存在下あるいは非存在下で培養後、ルシフェラーゼアッセイを施行した。その結果、Y-27632によりヒトインスリン遺伝子のプロモーター活性が上昇することが示された。このことよりRho-kinaseはインスリン遺伝子の発現を負に調節している可能性が示唆された。次にRho-kinaseにより調節される転写因子の結合部位を同定するため、種々の長さに切断したインスリン遺伝子プロモーターを挿入したルシフェラーゼベクターを作成し、ルシフェラーゼアッセイを施行した。その結果、PDX-1などが結合するA-boxをdeletionした場合、Y-27632による活性化は認められなかった。以上より、Rho-kinaseによるインスリン遺伝子プロモーター抑制は、A-boxに結合しうる転写因子を介している可能性が示唆された。さらにY-27632によるPDX-1のDNA結合能を調べるため、MIN6細胞の核蛋白を用いたElectropholation Mobility Shift Assayを施行した。その結果Y-27632処置によりPDX-1のDNA結合能は増強することが示唆された。以上の結果より、Rho-kinaseは、転写因子PDX-1を介してインスリン遺伝子の発現を負に調節している可能性が示唆された。今後、Rho-kinaseによるPDX-1の調節機構の更なる解析を進める予定である。
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