変異導入法を用いたβ3インテグリンに関わるシグナル伝達分子の同定

• 研究課題/領域番号: 18591095
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 血液内科学
• 研究機関: 国立循環器病センター(研究所)
• 研究代表者: 本田 繁則 国立循環器病センター(研究所), 病因部, 室長 (00303959)
• 研究分担者: 宮田 敏行 国立循環器病センター研究所, 病因部, 部長 (90183970) ; 冨山 佳昭 大阪大学, 医学部附属病院・輸血部, 講師 (80252667)
• 研究期間 (年度): 2006 – 2007
• 研究課題ステータス: 完了 (2007年度)
• 配分額: 3,890千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 390千円); 2007年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2006年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
• キーワード: インテグリン / シグナル伝達分子 / 血小板

研究概要

インテグリンはαおよびβ鎖のヘテロ2量体構造を有する接着受容体として機能している。インテグリンはその構造を変化することにより非活性状態から活性化状態に移行し機能を発揮すると考えられている。しかしながら、インテグリンの活性化に関わるシグナル伝達機構の詳細は不明である。β3インテグリンはαIIβ3およびαVβ3により構成されている。αIIbβ3は血小板に特異的な発現を認め、血小板凝集に重要な働きを担っている。一方、αVβ3は血管構成細胞、腫瘍細胞および炎症細胞などに発現しており血管新生、腫瘍の浸潤・転移および創傷治癒に関与している。
我々はインテグリンの活性化に関わる分子を同定するためにエネルギー依存性に活性化したキメラインテグリンαIIbβ3を発現する細胞株を樹立し、化学変異原を暴露させてインテグリンが非活性状態になるミュータントクローンを作製した。このミュータントを用いて発現クローニングを実施し、活性化を誘導する分子Integrin-linked kinase(ILK)を同定した。ILKのmRNAおよびgeneのシークエンス解析を発現クローニングに用いたミュータントにおいて行い、2種類のナンセンス変異を複合ヘテロ接合型で認めた。また、ミュータント細胞におけるILKの発現は欠如していた。化学変異原に暴露していない親株細胞を用いてILKのノックダウンを行ったところインテグリンの活性化状態が有意に抑制された。

研究成果

• [雑誌論文] Genotypes of vitamin K epoxide reductase,γ-glutamyl carboxylase,andcytochrome P450 2C9 as determinants of daily warfarin dose in Japanese patients. (2007)
  • 著者名/発表者名: Kimura R, , Miyashita K, Kokubo Y, Akaiwa Y, Ryoichi O, Nagatsuka K, Otsuki T, Okayama A, Minematsu K, Naritomi H, Honda S, Tomoike H, Miyata T
  • 雑誌名: Thromb Res 120 ページ: 181-186
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] A large deletion of the PROS1 gene in a deep vein thrombosis patient with protein S deficiency. (2007)
  • 著者名/発表者名: Yin T, Takeshita S, Sato Y, Sakata T, Shin Y, Honda S, Kawasaki T, Tsuji H, Kojima T, Madoiwa S, Sakata Y, Murata M, Ikeda Y, Miyata T
  • 雑誌名: Thromb Haemost 98 ページ: 783-789
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] A large deletion of the PROS1 gene in a deep vein thrombosis patient with protein S deficiency. (2007)
  • 著者名/発表者名: Yin T, Takeshita S, Sato Y, Sakata T, Shin Y, Honda S, Kawasaki T, Tsuji H, Kojima T, Madoiwa S, Sakata Y, Murata M, Ikeda Y, Miyata T
  • 雑誌名: Thromb Haemost 98-4 ページ: 783-789
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Genotypes of vitamin K epoxide reductase, γ-glutamyl carboxylase, and cytochrome P450 2C9 as determinants of daily warfarin dose in Japanese patients. (2007)
  • 著者名/発表者名: Kimura R, Miyashita K, Kokubo Y, Akaiwa Y, Ryoichi O, Nagatsuka K, Otsuki T, Okayama A, Minematsu K, Naritomi H, Honda S, Tomoike H, Miyata T
  • 雑誌名: Thromb Res 120 ページ: 181-186
  • 査読あり
• [雑誌論文] Complete deficiency in ADAMTS13 is prothrombotic, but it alone is not sufficient to cause thrombotic thrombocytopenic purpura. (2006)
  • 著者名/発表者名: F Banno, K Kokame, T Okuda, S Honda, S Miyata, H Kato,Y Tomiyama, T Miyata
  • 雑誌名: Blood 107-8 ページ: 3161-3166
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Adiponectin acts as an endogenous antithrombotic factor. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kato H, Kashiwagi H, Shiraga M, Tadokoro S, Kamae T, Ujiie H, Honda S, Miyata S, Ijiri Y, Yamamoto J, Maeda N, Funahashi T,Kurata Y, Shimomura I, Tomiyama Y, Kanakura Y
  • 雑誌名: Anterioscler Thromb Vasc Biol 26-1 ページ: 224-230
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Complete deficiency in ADAMTS13 is prothrombotic, but it alone is not sufficient to cause thrombotic thrombocytopenic purpura. (2006)
  • 著者名/発表者名: Banno F, Kokame K, Okuda T, Honda S, Miyata S, Kato h, Tomiyama Y, Mjyata T
  • 雑誌名: Blood 107・8 ページ: 3161-3166
• [雑誌論文] Protein S-K196E mutation as a genetic risk factor for deep vein thrombosis in Japanese patients. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kimura R, Honda S, Kawasaki T, Tsuji H, MadoiwaT S, Sakata Y, Kojima T, Murata M, Nishigami K, Chiku M, Hayashi T, Kokubo Y, Okayama A, Tomoike H, Ikeda Y, Miyata T
  • 雑誌名: Blood 107・4 ページ: 1737-1738
• [雑誌論文] Polymorphisms in vitamin K-dependent γ-carboxylation-related genes influence interindividual variability in plasma protein C and protein S activities in general population. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kimura R, Kokubo Y, Miyashita K, Otsubo R, Nagatsuka K, Otsuki T, Sakata T, Nagura J, Okayama A, Minematsu K, Naritomi H, Honda S, Sato K, Tomoike H, Miyata T
  • 雑誌名: Int J Hematol 84・5 ページ: 387-397
  • NAID: 10018670791
• [雑誌論文] Adiponectin acts as an endogenous antithrombotic factor (2006)
  • 著者名/発表者名: Kato H, Kashiwagi H, Shiraga M, Tadokoro S, Kamae T, Ujiie H, Honda S, Miyata S, Ijiri Y, Yamamoto J, Maeda N, Funahashi T, Kurata Y, Shimomura I, Tomiyama Y, Kanakura Y
  • 雑誌名: Arterioscler Thromb Vasc Biol 26・1 ページ: 224-230
• [学会発表] A large deletion of the PROS1 gene in a deep vein thrombosis patient with protein S deficiency. (2007)
  • 著者名/発表者名: Yin T, Takeshita S, Sato Y, Sakata T, Shin Y, Honda S, Kawasaki T, Tsuji H, Kojima T, Madoiwa S, Sakata Y, Murata M, Ikeda Y, Miyata T
  • 学会等名: 第30回日本血栓止血学会学術集会
  • 発表場所: 賢島宝生苑・志摩観光ホテル
  • 年月日: 2007-11-16
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] Effects of complete deficiency and C-terminal deletion of ADAMTS13 on hemostatic function in mice (2007)
  • 著者名/発表者名: Fumiaki Banno, Koichi Kokame, Tomohiko Okuda, Shigenori Honda, Shigeki Miyata, Hisashi Kato, Yoshiaki Tomiyama, Toshiyuki Miyata
  • 学会等名: International Mammalian Genome Conference
  • 発表場所: Kyoto
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] A large deletion of the PROS1 gene in a deep vein thrombosis patient with protein S deficiency. (2007)
  • 著者名/発表者名: Yin T, Takeshita S, Sato Y, Sakata T, Shin Y, Honda S, Kawasaki T, Tsuji H, Kojima T, Madoiwa S, Sakata Y, Murata M, Ikeda Y, Miyata T
  • 学会等名: Congress of the Japanese Society on Thrombosis Hemostasis
  • 発表場所: Mie
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] ADAMTS13 and its related issues, invited lecture (2006)
  • 著者名/発表者名: Toshiyuki Miyata
  • 学会等名: Gordon Research Conference
  • 発表場所: Waterville, ME, USA.
  • 年月日: 2006-07-11
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より