高病原性鳥インフルエンザ(H5N1)感染に対する治療用ヒト抗体製剤開発の研究

• 研究課題/領域番号: 18591120
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 膠原病・アレルギー・感染症内科学
• 研究機関: 長崎大学
• 研究代表者: 山城 哲 長崎大学, 国際連携研究戦略本部, 教授 (00244335)
• 研究分担者: 森田 公一 長崎大学, 熱帯医学研究所, 教授 (40182240)
• 研究期間 (年度): 2006 – 2007
• 研究課題ステータス: 完了 (2007年度)
• 配分額: 3,570千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 270千円); 2007年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2006年度: 2,400千円 (直接経費: 2,400千円)
• キーワード: ファージディスプレイ法 / 高病原性インフルエンザ / H5N1 / 新興・再興感染症 / ファージティスプレイ法

研究概要

18年度に構築したライブラリーサイズ約1.0×10^8のヒトFab呈示ファージライブラリーより、H5N1原に特異的結合能を示すFabを発現する3クローン(1E5,2A6,3D11)を分離した。大腸菌を用いてそのクローンをFabとして大量に発現後精製した。同FabはH5N1ウイルスに対し弱い血球凝集阻止反心(HI)を示した(1:4)。HI活性を強く示す抗体が得られない理由としてはボランティアの抗体価が低かったこと、採取した血液量が少なかったことが考えられる。それを用いた中和試験を行う予定である。次に19年度にベトナム国立衛生疫学研究所の協力により新たにH5N1(cladeII)に感染し回復したボランティアより2週間おきに計2回の採血を行った。本ボランティア血清はH5N1 cladeIウイルスにはHI活性を示さず、cladeIIウイルスに対してのみHI活性を示した(1:160)。新たに5N1(cladeII)に対して中和能を有するFabを単離する事を企図して、供与血液よりリンパ球を分離し、そこからRNAを抽出し、ヒト抗体部分重鎖および軽鎖部分に特異的なプライマーを用いて、抗体遺伝子をRT-PCR法にて増幅し、ヒトFabライブラリーの再構築を行っている。

研究成果

• [雑誌論文] Identification of a human monoclonal Fab with neutralizing activity against H3N2 influenza A Strain from a newly constructed human Fab library (2008)
  • 著者名/発表者名: Shibuya, T., Yamasbiro, T., Masaike, Y., Ohuchi, M., Uechi, G, Nishizono, A.
  • 雑誌名: Microbiology and Immunology 52 ページ: 162-170
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of a human monoclonal Fab with neutralizing activity against H3N2 influenza A strain from a newly constructed human Fab library (2008)
  • 著者名/発表者名: Shibuya, T., Yamashiro, T., Masaike, Y., Ohuchi, M., Uechi, G., Nishizono, A
  • 雑誌名: Microbiology and Immunology 52 ページ: 162-170
  • NAID: 10025691540
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Identification of a human monoclonal Fab with neutralizing activity against H3N2 influenza A strain from a newly constructed human Fab library (2008)
  • 著者名/発表者名: Shibuya, T., Yamashiro.T., Masaike, Y., Ohuchi, M., Uechi, G, Nishizono, A.
  • 雑誌名: Microbiology and Immunology 52 ページ: 162-170
  • NAID: 10025691540
  • 査読あり
• [雑誌論文] Construction of Human Fab(γl/κ)Library and Identification of Human Monoclonal Fab Possessing Neutralizing Potency against Japanese Encephalitis Virus (2007)
  • 著者名/発表者名: Arakawa, M., Yamashiro, T., Uechi, G, Tadano, M., Nishizono, A
  • 雑誌名: Microbiology and Immunology 51 ページ: 617-625
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] The Synthesis of a Panel of Human Molloclonal Antibodies with Neutralizine Activities against Viral Infectious Diseases (2007)
  • 著者名/発表者名: Yamashiro, T., Uechi, G.
  • 雑誌名: Tropical Medicine and Health 35 ページ: 43-45
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
  • 査読あり
• [雑誌論文] Construction of Human Fab(γ1/κ)Library and Identification of Human Monoclonal Fab Possessing Neutralizing Potency against Japanese Encephalitis Virus (2007)
  • 著者名/発表者名: Arakawa, M., Yamashiro, T., Uechi, G., Tadano, M., Nishizono, A
  • 雑誌名: Microbiology and Immunology 51 ページ: 617-625
  • NAID: 10020280044
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] The Synthesis of a Panel of Human Monoclonal Antibodies with Neutralizing Activities against Viral Infectious Diseases (2007)
  • 著者名/発表者名: Yamashiro, T., Uechi, G
  • 雑誌名: Tropical Medicine and Health 35 ページ: 43-45
  • NAID: 10019734341
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [雑誌論文] Construction of Human Fab(γ1/k) Library and Identification of Human Monoclonal Fab Possessing Neutralizing Potency against Japanese Encephalitis Virus (2007)
  • 著者名/発表者名: Arakawa, M., Yamashiro, T., Uechi, G, Tadano, M., Nishizono, A
  • 雑誌名: Microbiology and Immunology 51 ページ: 617-625
  • 査読あり
• [雑誌論文] The Synthesis of a Panel of Human Monoclonal Antibodies with Neutralizing Activities against Viral Infectious Diseases (2007)
  • 著者名/発表者名: Yamashiro, T., Uechi, G.
  • 雑誌名: Tropical Medicine and Health 352号 ページ: 43-45
  • NAID: 10019734341
  • 査読あり
• [雑誌論文] Construction of Human Fab (γ1/κ) Library and Identification of Human Monoclonal Fab Possessing Neutralizing Potency against Japanese Encephalitis Virus (2007)
  • 著者名/発表者名: Arakawa, M., Yamashiro, T., Uechi, G-i., Tadano, M., Nishizono,A.
  • 雑誌名: Microbiol Immunol 51(in press)
  • NAID: 10020280044
• [雑誌論文] The Synthesis of a Panel of Human Monoclonal Antibodies with Neutralizing Activities against Viral Infections Diseases (2007)
  • 著者名/発表者名: Yamashiro, T., Uechi, G.-i.
  • 雑誌名: Tropical Medicine and Health (in press)
• [学会発表] Construction of Human Fab Libraty and Molecular Cloning of Human Anti-lnfluenza Virus A Subtype H5N1 Monoclonal Molecules (2007)
  • 著者名/発表者名: Gen-ichiro Uechi, Le Thi, Quynh Mai, Doan Hai Yen, Tetsu Yamashiro.
  • 学会等名: Workshop(National Institue of Hygiene and Epidemiology, NIHE)
  • 発表場所: Hanoi Vietnam
  • 年月日: 2007-09-20
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] Construction of Human Fab library and Molecular Cloning of Human Anti-Influenza Virus A Subtype H5N1 Monoclonal Molecules (2007)
  • 著者名/発表者名: Gen-ichiro, Uechi, Le, Thi Quynh, Mai, Doan Hai, Yen, Tetsu, Yamashiro
  • 学会等名: Workshop(NIHE)
  • 発表場所: Hanoi Vietnam
  • 年月日: 2007-09-20
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] Construction of Human Fab and ScFv Libraries andMolecular Cloning of Human Anti-lnfluenza Virus A SubtypeH5N1 Monoclonal Molecules (2007)
  • 著者名/発表者名: Gen-ichiro Uechi, Le Thi Quynh Mai, Doan Hai Yen, Nguyen Le Khanh Hang, Kouichi Morita, Tetsu Yamashiro
  • 学会等名: Asian Research Forum2007
  • 発表場所: Nagasaki
  • 年月日: 2007-01-15
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] Construction of Human Fab and ScFv Libraries and Molecular Cloning of Human Anti-Influenza Virus A Subtype H5N1 Monoclonal Molecules (2007)
  • 著者名/発表者名: Gen-ichiro, Uechi, Le, Thi Quynh, Mai, Doan, Hai Yen, Nguyen Le, Khanh Hang, Kouichi, Morita, Tetsu, Yamashiro
  • 学会等名: Asian Research Forum 2007
  • 発表場所: Nagasaki
  • 年月日: 2007-01-15
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] The collaborative study on emerging and re-emerging infectious diseases in Vietnam:Enhancement of Research Capacity (2007)
  • 著者名/発表者名: Tetsu Yamashiro, Kouichi Morita, Shigeru Katamine, Masahiro Takagi, Osamu Nakagomi, Koya Ariyoshi, Kouichiro Kudoh, Naoto Keicho, Shinichi Oka, Kenji Hiravama.
  • 学会等名: The 2nd Thailand Japan Joint-Forum oninfectious diseases
  • 発表場所: Thailand
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] The collaborative study on emerging and re-emerging infectious diseases in Vietnam : Enhancement of Research Capacity (2007)
  • 著者名/発表者名: Tetsu, Yamashiro, Kouichi, Morita, Shigeru, Katamine, Masahiro, Takagi, Osamu, Nakagomi, Koya, Ariyoshi, Kouichiro, Kudoh, Naoto, Keicho, Shinichi, Oka, Kenji, Hirayama
  • 学会等名: The 2nd Thailand Japan Joint-Forum on infectious diseases
  • 発表場所: Thailand
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] The collaborative study on emerging and re-emerging infectious diseases in Vietnam Enhancement of Research Capacity (2006)
  • 著者名/発表者名: Tetsu Yamashiro, Kenji Hirayama, Kouichi Morita, Shigeru Katamine, Masahiro Takagi, Osamu Nakagomi, Koya Ariyoshi, Kouichiro Kudoh, Naoto Keicho, Satoshi Kimura, Yoshiki Aoki.
  • 学会等名: Joint International topical Medicine Meetink(JITMM)
  • 発表場所: Thailand
  • 年月日: 2006-11-29
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] The collaborative study on emerging and re-emerging infectious diseases in Vietnam : Enhancement of Research Capacity (2006)
  • 著者名/発表者名: Tetsu, Yamashiro, Kenji, Hirayama, Kouichi, Morita, Shigeru, Katamine, Masahiro, Takagi, Osamu, Nakagomi, Koya, Ariyoshi, Kouichiro, Kudoh, Naoto, Keicho, Satoshi, Kimura, Yoshiki, Aoki
  • 学会等名: Joint International Tropical Medicine Meeting(JITMM)
  • 発表場所: Thailand
  • 年月日: 2006-11-29
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] ベトナムにおけるH5N1感染症の状況 (2006)
  • 著者名/発表者名: 山城 哲
  • 学会等名: 鶏病研究会
  • 発表場所: 長崎
  • 年月日: 2006-10-25
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] Condition of H5N1 infection in Vietnam (2006)
  • 著者名/発表者名: Tetsu, Yamashiro
  • 学会等名: Chicken disease research meeting
  • 発表場所: Nagasaki
  • 年月日: 2006-10-25
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] デング熱回復者リンパ球を用いたヒトFabライブラリーの構築と抗デングウイルス3型中和モノクローナル抗体の分離、第4回沖縄フォーラム (2006)
  • 著者名/発表者名: 上地 玄一郎、山城 哲
  • 学会等名: 第4回沖縄フォーラム
  • 発表場所: 沖縄
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] コンビナトリアルバイオロジーを用いた抗日本脳炎ウイルス中和ヒトモノクローナル抗体の作製とその評価 (2006)
  • 著者名/発表者名: 荒川 満枝、山城 哲、上地 玄一郎、只野 昌之、西園 晃
  • 学会等名: 第4回沖縄フォーラム
  • 発表場所: 沖縄
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] デング熱回復者リンパ球を用いたヒトFabライブラリーの構築と抗デングウイルス3型中和モノクローナル抗体の分離 (2006)
  • 著者名/発表者名: 上地 玄一郎、山城 哲
  • 学会等名: 第41回日本脳炎生態学研究会
  • 発表場所: 長崎
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] ヒトFabライブラリーの作製と抗日本脳炎ウイルス中和能を有するヒトモノクローナルFab抗体の分離 (2006)
  • 著者名/発表者名: 荒川 満枝、山城 哲、只野 昌之、西園 晃
  • 学会等名: 第41回日本脳炎生態学研究会
  • 発表場所: 長崎
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] デング熱回復者リンパ球を用いたヒトFabライブラリーの構築と抗デングウイルス3型中和モノクローナル抗体の分離 (2006)
  • 著者名/発表者名: 上地 玄一郎、山城 哲
  • 学会等名: 第47回日本熱帯医学会
  • 発表場所: 長崎
  • 説明: 「研究成果報告書概要(和文)」より
• [学会発表] Isolation of neutralizing monoloconal antibody against dengue 3 from recovered patients lymphocyte (2006)
  • 著者名/発表者名: Gen-ichiro, Uechi, Tetsu, Yamashiro
  • 学会等名: The 4th Okinawa Forum
  • 発表場所: Okinawa
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] Nishizono Isolation and characterization of human monoclonal antibody against Japanese Encephalitis by using combinatorial biology (2006)
  • 著者名/発表者名: Arakawa, M., Yamashiro, T., Uechi, G., Tadano, M
  • 学会等名: 4th Okinawa Forum
  • 発表場所: Okinawa
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] Isolation of neutralizing monoloconal antibody against dengue 3 from recovered patients lymphocyte (2006)
  • 著者名/発表者名: Gen-ichiro, Uechi, Tetsu, Yamashiro
  • 学会等名: Japanese Encephalitis ecology meeting
  • 発表場所: Nagasaki
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] Nishizono Construction of human monoclonal library against Japanese Encephalitis and isolation of human Fab molecule (2006)
  • 著者名/発表者名: Arakawa, M., Yamashiro, T., Tadano, M
  • 学会等名: Japanese Encephalitis ecology meeting
  • 発表場所: Nagasaki
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より
• [学会発表] Isolation of neutralizing monoloconal antibody against dengue 3 from recovered patients lymphocyte (2006)
  • 著者名/発表者名: Gen-ichiro, Uechi, Tetsu, Yamashiro
  • 学会等名: Tropical Medicine and Health
  • 発表場所: Nagasaki
  • 説明: 「研究成果報告書概要(欧文)」より