研究課題
基盤研究(C)
プロテインCインヒビター(PCI)は主として肝臓、腎臓、及び精巣、卵巣などの生殖臓器で発現されるヘパリン結合性セリンプロテアーゼインヒビターで、血漿PCIは、主として抗凝固セリンプロテアーゼの活性化プロテインC(APC)の阻害因子として、尿中PCIは、尿プラスミノゲンアクチベータ(uPA)の阻害因子として機能し、それらに対する阻害活性はヘパリンにより著しく促進される。我々は、これまでに、PCIがuPAを阻害することにより種々の癌細胞のin vitroでのマトリゲル浸潤能を阻害すること、及び種々の癌細胞のin vivoでの増殖、転移を抑制し、その抑制活性はPCIのプロテアーゼインヒビター活性に依存しないことを明らかにしてきた。そこで、本研究では、PCIによる癌細胞の増殖、浸潤・転移抑制機序の解明を目的として、PCIの血管新生抑制活性に関して、バキュロウィルス発現系を用いて、組換え野生型PCI、プロテアーゼ阻害活性を持たないPCIの354番目のアルギニンをアラニンに変化させたPCI(R354A-PCI)及びプロテアーゼにより分解されたPCIのN末端側断片(NT-PCI)を作製し、詳細に検討した。その結果、in vivoラット角膜アッセイでは、野生型PCIと同様にR354A-PCIやNT-PCIに血管新生抑制活性が認められ、またin vitroにおける内皮細胞の管腔形成を指標とした血管新生もまた、野生型PCIと同様にR354A-PCIやNT-PCIにより著しく抑制され、その抑制活性は、これまでに血管新生抑制活性が報告されているヘパリン結合性セルピンのアンチトロンビン(プロテアーゼによる切断型)やpigment epithelium-derived factor(PEDF)と同程度であった。Western blot法を用いてヘパリン存在下、非存在下における血管内皮細胞増殖因子(Vascular endothelial growth factor: VEGF)誘導性のMAPK(Mitogen-activated protein kinase)のリン酸化に及ぼすPCIの影響に関して検討した結果、PCIは、ヘパリン存在下でのVEGF誘導性のMAPKのリン酸化を特異的に阻害することが明らかになった。以上の結果より、PCIの血管新生抑制活性は、そのプロテアーゼ阻害活性に依存せず、そのヘパリン結合性に起因する可能性が示唆された。
すべて 2008 2007 2006 その他
すべて 雑誌論文 (28件) (うち査読あり 12件) 学会発表 (19件) 備考 (2件)
Gut 57
ページ: 365-373
Gut 37
Semin Thromb Hemost 33
ページ: 46-52
J Thromb Haemost 5
ページ: 1477-1485
Int J Cancer 121
ページ: 955-965
Histchem Cell Biol 128
ページ: 293-300
ページ: 667-672
Am J Respir Crit Care Med 176
ページ: 1251-1260
ページ: 66-72
Sem Thromb Hemost 33
J Thromb Haemost 4
ページ: 1763-1773
ページ: 2331-2339
ページ: 2607-2615
Eur J Immunol 36
ページ: 3334-3345
http://www.medic.mie-u.ac.jp/molpath/index-j.html
