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新しい組織化学「酵素抗原法」の技術開発:組織切片において特異抗体産生細胞を染める

研究課題

研究課題/領域番号 18659103
研究種目

萌芽研究

配分区分補助金
研究分野 人体病理学
研究機関藤田保健衛生大学

研究代表者

堤 寛  藤田保健衛生大学, 医学部, 教授 (80138643)

研究分担者 稲田 健一  藤田保健衛生大学, 医学部, 准教授 (70246081)
鴨志田 伸吾  藤田保健衛生大学, 医学部, 講師 (70351020)
三浦 惠二  藤田保健衛生大学, 総合医科学研究所, 助教 (20199946)
有沢 富康  藤田保健衛生大学, 医学部, 准教授 (50273230)
研究期間 (年度) 2006 – 2007
研究課題ステータス 完了 (2007年度)
配分額 *注記
3,200千円 (直接経費: 3,200千円)
2007年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
2006年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
キーワード酵素抗原法 / 特異抗体産生形質細胞 / 酵素抗体法 / リンパ節 / 脾臓 / horseradish peroxidase / ovalbumin / keyhole limpet hemocyanin
研究概要

「酵素抗原法」は、酵素やハプテンなどで標識した抗原を用いて、組織切片上の特異抗体産生細胞を可視化する技術である。本技法により、「特異抗体産生細胞の局在観察」という新たな視点で病態を解析できる。我々は、酵素抗原法の再現を行い、horseradish peroxidase(HRP)を足底部から皮下免疫したラットの脾臓と膝窩リンパ節の凍結組織切片を、HRPで染色して、抗HRP抗体産生細胞を証明した。今回我々は、ovalbumin(OA)とkeyhole limpet hemocyanin(KLH)を用いて、HRP以外の抗原でも、酵素抗原法が適用可能か検証した。具体的には、OAとKLHをラットの足底部へ皮下免疫した後、脾臓および腋窩・膝窩・鼠蹊部のリンパ節を採取して、4%パラホルムアルデヒド固定後凍結組織切片を作製した。この切片に対して、ビオチン標識した各抗原を用いて組織染色を試みた。さらに、酵素処理による切片内の抗体活性の賦活化も検討した。その結果、採取したすべての組織において、切片を蛋白分解酵素処理することで、OAとKLHに対する抗体産生細胞が検出された。各抗原に特異的な抗体産生細胞の割合は、HRPを免疫した際と同様に、両抗原ともに、免疫部位に近いリンパ節の方が脾臓よりも高かった。以上の結果から、HRP以外の抗原でも、酵素抗原法が適用可能であることが証明された。そして、抗原の曝露がより著しい部位に、より多くの特異抗体産生細胞が集蔟することも再確認できた。

報告書

(2件)
  • 2007 実績報告書
  • 2006 実績報告書
  • 研究成果

    (6件)

すべて 2007 2006 その他

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 1件) 学会発表 (1件) 図書 (1件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Histopathological diagnosis of infectious diseases using patients' sera.2007

    • 著者名/発表者名
      Tsutsumi Y
    • 雑誌名

      Seminar Diagnost Pathol 24(4)

      ページ: 243-252

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] 胆道感染症の病理2006

    • 著者名/発表者名
      堤 寛
    • 雑誌名

      日本外科感染症学会誌 3(3)

      ページ: 173-181

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [雑誌論文] 糖尿病合併症の病理.感染症2006

    • 著者名/発表者名
      堤 寛
    • 雑誌名

      病理と臨床 24(7)

      ページ: 740-745

    • 関連する報告書
      2006 実績報告書
  • [学会発表] 「酵素抗原法」の技術的検討2007

    • 著者名/発表者名
      水谷泰嘉
    • 学会等名
      第26回分子病理学研究会 湘南シンポジウム
    • 発表場所
      葉山IPC国際センター
    • 年月日
      2007-06-08
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [図書] 完全病理学各論 全12巻2007

    • 著者名/発表者名
      堤 寛
    • 総ページ数
      1296
    • 出版者
      学際企画
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [備考]

    • URL

      http://info.fujita-hu.ac.jp/pathology1/study/naiyou/koso-kogen.pdf

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書

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公開日: 2006-04-01   更新日: 2016-04-21  

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