B型肝炎ウイルスS粒子形成能を利用した異種蛋白のS粒子表面上での発現と応用

• 研究課題/領域番号: 18659130
• 研究種目: 萌芽研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 浜松医科大学
• 研究代表者: 上田 啓次 浜松医科大学, 医学部, 教授 (00221797)
• 研究期間 (年度): 2006 – 2007
• 研究課題ステータス: 完了 (2007年度)
• 配分額: 3,300千円 (直接経費: 3,300千円); 2007年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円); 2006年度: 1,700千円 (直接経費: 1,700千円)
• キーワード: HBs / 粒子形成 / 異種蛋白 / ワクチン創成 / 万能型 / HBV / ワクチン

研究概要

B型肝炎ウイルス(HBV)のHBs蛋白はひじょうに効率よく分泌され粒子を形成することが知られている。本性質を利用し粒子表面上に異種蛋白を発現し様々な抗原に対応可能な万能型ワクチン創成技術開発へ応用することを考案した。このようなことが実際可能かどうかを確認するため異種蛋白としてはヒスチジンヘキサマー-Express(His6-Exp)タグを用いて,分泌シグナルが存在するとされるHBsN末約20アミノ酸を残しその後に続く親水性部分に挿入するタイプや単純にN末に融合させるタイプなどのうち,どのような構築が最適か更なる検討を培養細胞系で検討した。その結果HBsのORFの5'に単純に融合する(His6-Exp-HBs)ことが最適であることが解った。本発現ベクターを培養細胞へトランスフェクションし一過性発現系及び安定発現系にて培養上清を回収した。培養上清中に分泌されたHis6-Exp-HBs蛋白がNiNTA(His6アフィニティー担体)アガロースで回収・濃縮されることを確認した。更にスークロース密度勾配遠心で比重1.15〜1.18g/m1に集積することを確認した。これらの結果はHis6-Exp-HBsが粒子を形成していることを示している。
粒子形成能を更に具体的に示すため電顕レベルでの粒子の証明,免疫原性を証明するためのマウスへの接種実験が進行中である

研究成果

• [雑誌論文] KSHV RTA induces a transcriptional repressor, HEY1 that represses rta promoter. (2006)
  • 著者名/発表者名: Yada, K., Do, E., Sakakibara, S., Ohsaki, E., Ito, E., Watanabe, S., Ueda, K.
  • 雑誌名: Biochem, Biophys. Res. Comm. 345 ページ: 410-418
• [雑誌論文] Lack of a Mechanism of Faithful Partition and Maintenance for the KSHV Genome. (2006)
  • 著者名/発表者名: Ueda, K., Sakakibara, S., Ohsaki, E., Yada, K.
  • 雑誌名: Virus Research 122 ページ: 85-94
• [雑誌論文] KSHVの遺伝子とその産物.ヘルペスウイルス学-基礎・臨床研究の進歩 (2006)
  • 著者名/発表者名: 矢田佳織, 大崎恵理子, 上田啓次
  • 雑誌名: 日本臨床 64 ページ: 538-542
• [雑誌論文] KSHVの潜伏感染と再活性化機構.ヘルペスウイルス学-基礎・臨床研究の進歩- (2006)
  • 著者名/発表者名: 大崎恵理子, 矢田佳織, 上田啓次
  • 雑誌名: 日本臨床 64 ページ: 589-593
• [産業財産権] HBsペプチド融合体 (2008)
  • 発明者名: 上田 啓次
  • 権利者名: 浜松医科大学
  • 産業財産権番号: 2008-063642
  • 出願年月日: 2008-03-13