研究課題
萌芽研究
私共はHDLが有する抗炎症作用の機序に関して検討し。健常人末梢血単球を単離・培養後、単球由来マクロファージ(MΦ)に分化させた。このMΦでは炎症性サイトカインTNFαやMMP-9のmRNA発現、蛋白の分泌が培養に伴って増加するが、MΦをHDLと培養すると、TNFαやMMP-9mRNAの発現が著減したが、MΦのHDL受容体であるモエシン様HDL結合蛋白を中和抗体で阻害しても、それらの減少に変化を認めなかった。従って、HDLがMΦの産生する未知のサイトカインと結合し、中和する可能性を考えた。そこで、MΦの培養上清より、アポA-Iと結合する約88kDaの蛋白を精製し、その内部アミノ酸配列を決定した結果、炎症性サイトカインであるプロエピテリン(PEPI)と同一であった。ヒトPEPI遺伝子をクローニングし、CHO細胞でPEPIを発現させて精製した。また、それぞれの精製物をマウス及びウサギに免疫し、モノクロ及びポリクロ抗体を得、ELISAを確立した。ヒトの健常人血清・尿の検討では、CVも5%未満と良好なアッセイであることを確認している。一方、PEPIはHDL及びアポA-Iと結合することも確認しているが、MΦにおけるPEPIの産生は分化に伴って増加し、PEPIが大動脈、冠動脈の動脈硬化巣のshoulder部分の泡沫化MΦに存在することを組織学的に確認した。MΦが産生するサイトカインはautocrine的に作用する事が多いことから、PEPIのMΦに対する効果とHDLによる干渉を検討したところ、PEPIがMφのTNFα、IL-1β、MMP-9mRNA発現を約80倍、8倍、3倍に増強し、蛋白発現、分泌も同様に著増させ、強い炎症惹起作用を有することが解明された。このPEPIによるMφのTNFα・IL-1β・MMP-9の発現増強作用は、HDLまたはアポA-Iの存在下で完全に抑制され、その抑制作用はHDL/apoA-IがPEP1と結合することで観察された。また、MφのTNFα、IL-1β、MMP-9mRNA発現はPEPI抗体により抑制され、HDLの抗炎症作用はHDLがMφから分泌されるPEPIとの結合を介して起こると考えられた。
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