| 研究課題/領域番号 |
18700318
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
神経科学一般
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
葛西 秀俊 神戸大学, 大学院・医学系研究科, 助教 (40403232)
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| 研究期間 (年度) |
2006 – 2007
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| 研究課題ステータス |
完了 (2007年度)
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| 配分額 *注記 |
3,600千円 (直接経費: 3,600千円)
2007年度: 1,400千円 (直接経費: 1,400千円)
2006年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
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| キーワード | トランスジェニックマウス / Rho GTPase / C3 |
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| 研究概要 |
前年度に、Cre-loxP組換えを用いて小脳プルキンエ細胞特異的にC3毒素を発現するトランスジェニックマウスを複数系統作製したが、小脳懸濁液のウェスタンブロット解析では、C3毒素の発現を検出することができなかった。そこで本年度は、マウスへの薬剤(テトラサイクリンまたはドキシサイクリン)の投与によって遺伝子の発現をオン・オフすることができるTet-OFFシステムを利用したトランスジェニックマウスの作製を試みた。プルキンエ細胞特異的にトランス転写活性化因子tTAを発現するトランスジェニックマウスは、当研究室において既に作製済みであった。よって、tTAが結合するプロモータ配列(TRE)下に、C3遺伝子・IRES・EGFPをタンデムに繋いだトランスジーンを作製した。トランスジェニックマウスの作製に先立って、COS7培養細胞に作製したトランスジーンを導入し、C3およびEGFPの発現を評価した。
COS7細胞の蛍光観察の結果、EGFPを発現している細胞は、細胞の形態が著しく変形し、死滅している細胞も多く観察された。これはC3毒素の発現によってRhoが不活性化され、細胞骨格系に異常を来たしたためであると考えられる。さらに、C3およびEGFPの発現は、培地へのテトラサイクリン投与によって消失した。よって、作製したトランスジーンは、C3およびEGFPを薬剤投与依存的に制御できることが確認できた。現在、このトランスジーンを用いて遺伝子改変マウスを作製している。
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