ゲノム解析によるカンキツグリーニング病原細菌と宿主相互作用の解明

• 研究課題/領域番号: 18780033
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 植物病理学
• 研究機関: 独立行政法人農業技術研究機構
• 研究代表者: 宮田 伸一 農業・食品産業技術総合研究機構, 果樹研究所・カンキツグリーニング病研究チーム, 主任研究員 (00313015)
• 研究期間 (年度): 2006 – 2007
• 研究課題ステータス: 完了 (2007年度)
• 配分額: 3,400千円 (直接経費: 3,400千円); 2007年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円); 2006年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
• キーワード: カンキツグリーニング病 / 罹病ニチニチソウ / ランダムクローニング

研究概要

昨年までに,カンキツグリーニング病を罹病させたニチニチソウの主脈を用いて、Cα. L. asiaticusの濃縮画分からの抽出DNAを用い,ゲノムDNA増幅キットによってゲノムDNAの増幅の後,プラスミドベクターにショットガンクローニングして塩基配列決定を行った。今年度は本クローニング手法を繰り返し実行し,その結果,第1段階スクリーニングによってα-プロテオバクテリア由来の配列に分類されるクローンを選抜し,さらにPCRによる第2段階スクリーニングを行って陽性クローンについては全塩基配列を改めて決定した。
これらの陽性クローンの塩基配列情報を元に疎水性領域をもつものを探索したが,膜タンパク質のようにトランスメンブレンドメイン(疎水性領域と親水性領域が咬互に存在する)を持つものは見つからなかった。またドメインデータベースに対して検索を行ったところ、細胞外にSecシステムやABCトランスポーターによって輸送されるようなシグナルドメインをもつものも存在しなかった。しかし細胞外からの熱・浸透圧・イオン濃度などの刺激を受容して遺伝子発現制御を行うシグナル伝達系である二成分制御系因子の受容体であるSensor Kinase候補が存在したため,今後は全長配列の決定に向けてTail-PCR法やGenomic Walker Kitなどによる隣接領域の取得を試み、さらにペアとなるReceiver Domainの候補遺伝子の探索に取り組む。

研究成果

• [雑誌論文] Molecular and serological characterization of cucumber mottle virus, a new cucurbit-infecting Tobamo-like virus. (2007)
  • 著者名/発表者名: Orita, H., Sakai, J., Kubota, K., Okuda, M., Tanaka, Y., Hanada, K., Imamura, Y., Nishiguchi, M., Karasev, A., Miyata, S. and Iwanami, T.
  • 雑誌名: Plant Disease 91 ページ: 1574-1578
  • 査読あり
• [雑誌論文] Apple aminopropyl transferase, MdACL5 interacts with putative elongation factor 1-a and S-adenosylmethionine synthase. (2007)
  • 著者名/発表者名: He, L., Ban, Y., Miyata, S., Kitashiba, H. and Moriguchi, T.
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 366 ページ: 162-167
  • 査読あり
• [雑誌論文] Positive selection acting on a surface membrane protein of the plant-pathogenic phytoplasmas. (2006)
  • 著者名/発表者名: Kakizawa S, Oshima K, Jung HY, Suzuki S, Nishigawa H, Arashida R, Miyata S, Ugaki M, Kishino H, Namba S
  • 雑誌名: Journal of Bacteriology 118 ページ: 3424-3428
• [学会発表] カンキツグリーニング病原細菌日本株のファージ様DNAポリメラーゼ遺伝子領域の解析 (2007)
  • 著者名/発表者名: 岩波徹・冨村健太・古屋典子・宮田伸一・濱島朗子・烏越博明・村山裕子・河野伸二・奥田充
  • 学会等名: 九州病害虫研究会秋季(第74回)研究発表会
  • 発表場所: 鹿児島県
  • 年月日: 2007-10-31
• [学会発表] 東アジアから採集したミカンキジラミの個体識別 (2007)
  • 著者名/発表者名: 冨村健太・井上広光・芦原亘・古屋典子・宮田伸一・松比良邦彦・安田慶次・岩波徹
  • 学会等名: 九州病害虫研究会秋季(第74回)研究発表会
  • 発表場所: 鹿児島県
  • 年月日: 2007-10-31
• [学会発表] 台湾のカンキツグリーニング病には塩基配列に変異を持つ病原力変異株が存在する (2007)
  • 著者名/発表者名: 宮田伸一・冨村健太・古屋典子・蘇 鴻基・岩波徹
  • 学会等名: 平成19年度 日本植物病理学会関東部会
  • 発表場所: 東京農業大学
  • 年月日: 2007-09-15
• [学会発表] カンキツグリーニング病原細菌の台湾分離株と日本分離株との間に認められた遺伝的変異 (2007)
  • 著者名/発表者名: 古屋典子・宮田伸一・冨村健太・久保田健嗣・奥田充・蘇鴻基・岩波徹
  • 学会等名: 平成19年度 日本植物病理学会関東部会
  • 発表場所: 東京農業大学
  • 年月日: 2007-09-15
• [学会発表] カンキツグリーニング病原細菌のファージ様DNAポリメラーゼ遺伝子領域による東南アジア産分離株の塩基配列の比較 (2007)
  • 著者名/発表者名: 冨村健太・古屋典子・宮田伸一・久保田健嗣・奥田充・Siti Subandiyah・岩波徹
  • 学会等名: 平成19年度 日本植物病理学会関東部会
  • 発表場所: 東京農業大学
  • 年月日: 2007-09-15