腸管神経と腎臓の発生過程の動的観察とGDNFシグナルの役割の解明

研究課題

研究課題/領域番号	18790154
研究種目	若手研究(B)
配分区分	補助金
研究分野	解剖学一般(含組織学・発生学)
研究機関	独立行政法人理化学研究所
研究代表者	上坂敏弘理化学研究所, 神経分化・再生研究チーム, 研究員 (90304451)
研究期間 (年度)	2006 – 2007
研究課題ステータス	完了 (2007年度)
配分額 *注記	3,300千円 (直接経費: 3,300千円) 2007年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円) 2006年度: 2,000千円 (直接経費: 2,000千円)
キーワード	GDNF / 腸神経 / ヒルシュスプルング病 / RET / 細胞死 / Hischsprung病 / 神経栄養因子
研究概要	神経堤細胞が腸管全体に移行し、神経分化をすでに開始しているマウス胚15.5日目にGDNF受容体を条件的ノックアウトしたところ、結腸遠位部以降において36時間以内に神経網が消失することを見いだした。つまり、生体内でGDNFシグナルが腸神経細胞の生存に必須であることを初めて示したことになる。ヒルシュスプルング病における腸管壁内神経節細胞の先天的欠損は神経堤細胞の移行異常によるものと従来考えられてきたが、我々の研究により、GDNF/RETシグナルの減少による神経細胞死の可能性が新たに出てきた。そこで、Ret遺伝子変異によるヒルシュスプルング病モデルマウスを作製し、細胞死の有無を検証した。我々は、マウスにおいてRETチロシンキナーゼの発現を通常の約30%に下げることで、従来のRetノックアウトマウスと異なり、腎臓やモーターニューロンの発生異常は認められず、結腸遠位部以降の腸神経の欠損が認められ、またこの異常の発症率がオスに高い傾向がみられるというヒルシュスプルング病の多くの特徴を示すことを見いだした。このモデルマウスにおいてRetの発現の減少が後腸遠位部の神経細胞の細胞死を引き起こすことをtime-lapse観察、電子顕微鏡観察により確認した。このモデルマウスは、Ret遺伝子変異によるヒルシュスプルング病の発症メカニズムの解明につながる有用なツールであり、発症に神経堤細胞の移行異常だけでなく神経細胞死が関与していることを強く示唆した初めての研究である。