メガリンの細胞内輸送を調節する分子学的機序の解明

• 研究課題/領域番号: 18790559
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 腎臓内科学
• 研究機関: 新潟大学
• 研究代表者: 飯野 則昭 新潟大学, 大学院医歯学総合研究科, 特任助教 (10420308)
• 研究期間 (年度): 2006 – 2008
• 研究課題ステータス: 完了 (2008年度)
• 配分額: 3,010千円 (直接経費: 2,800千円、間接経費: 210千円); 2008年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円); 2007年度: 1,000千円 (直接経費: 1,000千円); 2006年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
• キーワード: megalin / Dab2 / ARH / endocytosis / immunoprecipitation / メガリン / non-muscle myosin heavy chain IIA / Cubilin / 細胞内輸送機構 / Angiotensin II-ATla受容体 / non muscle myosin heavy chain IIA / disable-2 / 免疫沈降法 / 質量分析 / モーター蛋白 / GST pulldown / non muscle myosin heavy chain / GST pull down

研究概要

メガリンの細胞質領域と蛋白複合体を形成する新規蛋白non-muscle myosin heavy chain IIA(NMHCII-A)を培養細胞(IRPTC)からimmunoprecipitation 法と質量分析の手法で同定した。NMHCII-A はDab2 を介してメガリンの細胞質領域と結合することが明らかになった。NMHCII-A の機能阻害するblebbistatin を培養細胞に添加すると、メガリンのリガンドであるlactoferrin の細胞内への取り込みが抑制されることが明らかになった。さらに、blebbistatin 投与下でのメガリン受容体の動きを可視化すると、メガリンはリガンド結合後も細胞表面に留まっているように見えた。このことからNMHCII-A はメガリンのエンドサイトーシスにおいて、機能的に重要な働きを有していることが明らかになった。Sucrose gradientと超遠心を組み合わせて細胞内の各コンポーネントを分画したところ、メガリン、Dab2、NMHCII-A は同一のendosomal fraction に存在することも明らかになった。以上よりIn vivoにおいてもこれらの三者は協調しながらメガリンのエンドサイトーシスを調節している可能性が示唆された。今後、さらに知見が蓄積されることで、複雑なエンドサイトーシスの分子学的機序が明らかにされることが期待される。

研究成果

• [雑誌論文] Megalin and nonmuscle myosin heavy chain IIA interact with the adaptor protein Disabled-2 in proximal tubule cells (2009)
  • 著者名/発表者名: Hosaka K, Takeda T, Iino N, Hosojima M, Sato H, Kaseda R, Yamamoto K, Kobayashi A, Gejyo F, Saito A
  • 雑誌名: Kidney Int (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Regulation of megalin expression in cultured proximal tubule cells by angiotensin II type 1A receptor- and insulin-mediated signaling cross talk (2009)
  • 著者名/発表者名: Hosojima M, Sato H, Yamamoto K, Kaseda R, Soma T, Kobayashi A, Suzuki A, Kabasawa H, Takeyama A, Ikuyama K, Iino N, Nishiyama A, Thekkumkara TJ, Takeda T, Suzuki Y, Gejyo F, Saito A
  • 雑誌名: Endocrinology 150(2) ページ: 871-878
  • 査読あり
• [雑誌論文] 次世代血液浄化療法の現状と展望 (2009)
  • 著者名/発表者名: 飯野則昭、風間順一郎、下条文武
  • 雑誌名: 腎と透析 ページ: 647-650
• [雑誌論文] Megalin and nonmuscle myosin heavy chain IIA interact with the adaptor protein Disabled-2 in proximal tubule cells. (2009)
  • 著者名/発表者名: Hosaka K
  • 雑誌名: Kidney International In press
  • 査読あり
• [雑誌論文] Regulation of megalin expression in cultured proximal tubule cells by angiotensin II type 1A receptor- and insulin-mediated signaling cross talk (2009)
  • 著者名/発表者名: Hosojima M
  • 雑誌名: Endocrinology 150 ページ: 871-878
  • 査読あり
• [雑誌論文] The endocytic adaptor protein ARH associates with motor and centrosomal proteins and is involved in centrosome assembly and cytokinesis (2008)
  • 著者名/発表者名: Lehtonen S, Shah M, Nielsen R, Iino N, Ryan JJ, Zhou H, Farquhar MG
  • 雑誌名: Mol Biol Cell 19(7) ページ: 2949-2961
  • 査読あり
• [雑誌論文] 心血管イベントとしてのCKD の病態と治療の方向性 (2008)
  • 著者名/発表者名: 飯野則昭、斎藤亮彦、下条文武
  • 雑誌名: 血栓と循環 ページ: 338-343
• [雑誌論文] 腹膜透析症例における動脈硬化指数の検討 (2008)
  • 著者名/発表者名: 後藤眞、山本卓、飯野則昭、杉山晴子、下条文武、丸山弘樹
  • 雑誌名: 腎と透析 ページ: 380-382
• [雑誌論文] The endocytic adaptor protein ARH associates with motor and centrosomal proteins and is involved in centrosome assembly and cytokinesis (2008)
  • 著者名/発表者名: Lehtonen S
  • 雑誌名: Molecular Biology of the Cell 19 ページ: 2949-2961
  • 査読あり
• [雑誌論文] 心血管イベントとしてのCKDの病態と治療の方向性 (2008)
  • 著者名/発表者名: 飯野則昭
  • 雑誌名: 血栓と循環 16 ページ: 338-343
• [雑誌論文] 次世代血液浄化療法の現状と展望 (2008)
  • 著者名/発表者名: 飯野則昭
  • 雑誌名: 腎と透析 65 ページ: 647-650
• [雑誌論文] Functional characterization of a novel missense CLCN5 mutation causing alterations in proximal tubular endocytic machinery in Dent's disease (2007)
  • 著者名/発表者名: Tanuma A, Sato H, Takeda T, Hosojima M, Obayashi H, Hama H, Iino N, Hosaka K, Kaseda R, Imai N, Ueno, M, Yamazaki M, Sakimura K, Gejyo F, Saito A
  • 雑誌名: Nephron Physiol 107(4) ページ: 87-97
  • 査読あり
• [雑誌論文] Role of megalin, a proximal tubular endocytic receptor, in calcium and phosphate homeostasis (2007)
  • 著者名/発表者名: Saito A, Iino N, Takeda T, Gejyo F
  • 雑誌名: Ther Apher Dial 11 Suppl 1
• [雑誌論文] Megalin-mediated endocytosis of cystatin C in proximal tubule cells (2007)
  • 著者名/発表者名: Kaseda R, Iino N, Hosojima M, Takeda T, Hosaka K, Kobayashi A, Yamamoto K, Suzuki A, Kasai A, Suzuki Y, Gejyo F, Saito A
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 357(4) ページ: 1130-1134
  • 査読あり
• [雑誌論文] 腎臓におけるAGE の代謝機構近位尿細管上皮細胞の役割 (2007)
  • 著者名/発表者名: 斎藤亮彦、飯野則昭、竹田徹朗、下条文武
  • 雑誌名: 生体の科学 ページ: 540-542
• [雑誌論文] レプチンと腎疾患 (2007)
  • 著者名/発表者名: 飯野則昭、濱ひとみ、竹田徹朗、下条文武、斎藤亮彦
  • 雑誌名: Annual review 腎臓 ページ: 20-23
• [雑誌論文] High-fat diet in low-dose-streptozotocin-treated heminephrectomized rats induces all features of human type 2 diabetic nephropathy : a new rat model of diabetic nephropathy (2006)
  • 著者名/発表者名: Sugano M, Yamato H, Hayashi T, Ochiai H, Kakuchi J, Goto S, Nishijima F, Iino N, Kazama JJ, Takeuchi T, Mokuda O, Ishikawa T, Okazaki R.
  • 雑誌名: Nutr Metab Cardiovasc Dis 16(7) ページ: 477-484
  • 査読あり
• [学会発表] Angiotensin IIおよびInsulinによる近位尿細管上皮細胞機能分子群の細胞内輸送機序の解析 (2008)
  • 著者名/発表者名: 山本佳子
  • 学会等名: 第51回日本腎臓学会学術総会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
  • 年月日: 2008-05-30
• [学会発表] Dent秒責任遺伝子(CLOCN5)G333Rミスセンス変異による糖鎖修飾異常 (2008)
  • 著者名/発表者名: 佐藤博慶
  • 学会等名: 第51回日本腎臓学会学術総会
  • 発表場所: 福岡国際会議場
  • 年月日: 2008-05-30
• [学会発表] アンギオテンシンII-AT1a受容体を介するメガリンの発現抑制機構とインスリンによる拮抗作用 (2007)
  • 著者名/発表者名: 細島康宏
  • 学会等名: 第50回日本腎臓学会学術集会
  • 発表場所: アクトシティー浜松
  • 年月日: 2007-05-26