| 研究課題/領域番号 |
18790678
|
|---|
| 研究種目 |
若手研究(B)
|
| 配分区分 | 補助金 |
|---|
| 研究分野 |
膠原病・アレルギー・感染症内科学
|
|---|
| 研究機関 | 京都大学 |
|---|
研究代表者 |
野島 崇樹 京都大学, 医学研究科, 助教 (30327514)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2006 – 2007
|
| 研究課題ステータス |
完了 (2007年度)
|
| 配分額 *注記 |
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2007年度: 1,300千円 (直接経費: 1,300千円)
2006年度: 2,100千円 (直接経費: 2,100千円)
|
|---|
| キーワード | 関節リウマチ / 自己抗原 / 破骨細胞 |
|---|
| 研究概要 |
ヒト末梢血単核細胞(PBMC)を用いた破骨細胞形成系の確立
1) Ficoll-Paqueを用いて健常人協力者よりPBMCを回収し、マグネットビーズと抗ヒトCD14モノクローナル抗体を用いてCD14(+)細胞を分離し、10%FBS・M-CSF(25ng/ml)入りαMEMにて培養を行い、Trypsin-EDTA処理後dish付着細胞を回収し、更にFBS・M-CSF・ODF入りαMEMにて多核巨細胞を回収した。
2) 1)にて回収した多核巨細胞についてTRAP (Tartrate-resistant Acid Phosphatase)染色陽性であることを確認。成熟破骨細胞は、5%FBSよりも10%FBS、ODF 20 40 100ng/mlのうち、100ng/mlにおいて、回収率がよいことが確認された。
3) 成熟破骨細胞の機能を確認するため、carbonated calcium phosphate付着dish上でpit formationを確認した。成熟破骨細胞のpit formationについては、実験毎のばらつきが多く、一定した評価を確認することが難しかった。
ヒト末梢血単核細胞(PBMC)を用いた破骨細胞形成系におけるRA自己抗原の発現
1) 上記、ヒトPBMCからの成熟破骨細胞形成系において、カルパイン・カルパスタチン,c-myc・FBPの発現をRT-PCRで確認した。
2) また、カルパイン・カルパスタチンについて、成熟破骨細胞における、蛋白発現をWestern blottingにて確認し、成熟に伴い、カルパイン・カルパスタチンの蛋白発現増加が確認された。
|
