| 研究概要 |
(1)ラパマイシン誘導ヒト制御性T細胞の産生する細胞増殖抑制因子の分離精製およびアミノ酸配列:健常人ボランティアより得た末梢血より,密度勾配遠心法により単核球を分離後,磁気ビーズ法を用いてCD4+T細胞を分離し,ラパマイシン及びIL-2存在下,抗ヒトCD3/CD28結合ビーズを用いて連続刺激することにより,細胞を培養増殖させた.細胞数が目的の量に達した段階で,細胞を洗浄し,ラパマイシンおよびIL-2を除き,無血清培養液を用いて,4日間培養後,培養液を回収した.得られた培養液を添加することにより,ヒト末梢血単核球の抗ヒトCD3抗体刺激による細胞増殖活性は,濃度依存的に抑制された.得られたラパマイシン誘導制御性T細胞の培養液を限外ろ過/遠心式フィルターにより濃縮し,ゲルろ過カラムクロマトグラフィー法により培養液中の細胞増殖抑制因子を分離した結果,細胞増殖抑制活性は,分子量約10kDの分画中に認められた.さらに,SDS-PAGE法により分離後,質量分析装置により解析した結果,3種類のタンパク質が同定された.
(2)培養上清を用いた増殖抑制因子の生物活性の検討:細胞増殖制活性を持つ培養上清を濃縮後,マウス同種異系皮膚移植モデルに投与し,移植拒絶抑制効果に関して検討した.マウス皮膚移植モデルは,BalbヌードマウスにC57BL/6マウスの皮膚を移植し,Balb/cマウスより得たT細胞を移入することにより,拒絶を誘導した.濃縮培養培養上清投与群の皮膚移植拒絶期間は,コントロール群と比較し場合に,統計的有意な差は認められなかった.
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