TCRの抗原同定とTCR遺伝子療法に向けた副作用予測の基盤構築

• 研究課題/領域番号: 18H02689
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 審査区分: 小区分50020:腫瘍診断および治療学関連
• 研究機関: 富山大学
• 研究代表者: 小澤 龍彦 富山大学, 学術研究部医学系, 准教授 (10432105)
• 研究期間 (年度): 2018-04-01 – 2021-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2020年度)
• 配分額: 17,420千円 (直接経費: 13,400千円、間接経費: 4,020千円); 2020年度: 4,810千円 (直接経費: 3,700千円、間接経費: 1,110千円); 2019年度: 5,330千円 (直接経費: 4,100千円、間接経費: 1,230千円); 2018年度: 7,280千円 (直接経費: 5,600千円、間接経費: 1,680千円)
• キーワード: T細胞受容体 / TCR遺伝子療法 / がん免疫療法 / ペプチド/MHC / TCR / レパートリー解析 / 抗原同定

研究成果の概要

T細胞に発現しているT細胞受容体(TCR)を用いた、がんの新しい治療法の研究が進んでいる。しかしながら機能的なTCRを単離することと、その反応性を解析して副作用を予測することは容易では無かった。本研究を通じて、がんに浸潤しているT細胞から、元のがん細胞に反応するTCRを得る方法と、TCRの反応性を解析する簡便なツールであるペプチド/MHCの容易な作製法を確立した。これらの結果は、今後のTCR遺伝子療法によるがん治療を開発する上で役立つことが期待される。

研究成果の学術的意義や社会的意義

がんに対する新しい治療法として、T細胞が持っているT細胞受容体(TCR)を使った免疫療法、TCR遺伝子療法の研究が進んでいる。しかしながらTCR遺伝子療法に用いたTCRが類似した配列を持つ自己抗原を認識して重篤な副作用を起こす症例が報告されている。本研究では、TCRの反応性を解析する基盤作りを行い、TCRの反応性を解析する簡便なツールであるペプチド/MHCの容易な作製法を確立した。本研究成果を応用することでTCR遺伝子療法のさらなる発展が期待される。

研究成果

• [雑誌論文] Evaluation of SARS-CoV-2 neutralizing antibodies using a vesicular stomatitis virus possessing SARS-CoV-2 spike protein. (2021)
  • 著者名/発表者名: Tani H, Kimura M, Tan L, Yoshida Y, Ozawa T, Kishi H, Fukushi S, Saijo M, Sano K, Suzuki T, Kawasuji H, Ueno A, Miyajima Y, Fukui Y, Sakamaki I, Yamamoto Y, Morinaga Y
  • 雑誌名: Virology Journal 巻: 18 号: 1 ページ: 16-16
  • DOI: 10.1186/s12985-021-01490-7
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Characterization of pseudotyped vesicular stomatitis virus bearing the heartland virus envelope glycoprotein. (2021)
  • 著者名/発表者名: Kimura M, Egawa K, Ozawa T, Kishi H, Shimojima M, Taniguchi S, Fukushi S, Fujii H, Yamada H, Tan L, Sano K, Katano H, Suzuki T, Morikawa S, Saijo M, Tani H.
  • 雑誌名: Virology 巻: 556 ページ: 124-132
  • DOI: 10.1016/j.virol.2020.10.006
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Rapid and efficient generation of T-cell receptor-like antibodies using chip-based single-cell analysis. (2021)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Kobayashi E, Hamana H, Nakamura T, Lyu F, Hayashi A, Muraguchi A, Kishi H
  • 雑誌名: Eur. J. Immunol. 巻: in press 号: 7 ページ: 1850-1853
  • DOI: 10.1002/eji.202049083
  • 査読あり
• [雑誌論文] Relationship between T cell receptor clonotype and PD-1 expression of tumor-infiltrating lymphocytes in colorectal cancer. (2020)
  • 著者名/発表者名: Sukegawa K, Shitaoka K, Hamana H, Kobayashi E, Miyahara Y, Fujii K, Tsuda K, Saeki S, Nagata T, Ozawa T, Saito S, Fujii T, Muraguchi A, Shiku H, Kishi H.
  • 雑誌名: Eur. J. Immunol. 巻: 50 号: 10 ページ: 1580-1590
  • DOI: 10.1002/eji.201948399
  • 査読あり
• [雑誌論文] Physiologic Target, Molecular Evolution, and Pathogenic Functions of a Monoclonal Anti-Citrullinated Protein Antibody Obtained From a Patient With Rheumatoid Arthritis. (2020)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Ouhara K, Tsuda R, Munenaga S, Kurihara H, Kohno H, Hamana H, Kobayashi E, Taki H, Tobe K, Sugiyama E, Muraguchi A, Kishi H.
  • 雑誌名: Arthritis Rheumatol. 巻: 72 号: 12 ページ: 2040-2049
  • DOI: 10.1002/art.41426
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] A frequent nonsense mutation in exon 1 across certain HLA-A and -B alleles in leukocytes of patients with acquired aplastic anemia. (2020)
  • 著者名/発表者名: Mizumaki H, Hosomichi K, Hosokawa K, Yoroidaka T, Imi T, Zaimoku Y, Katagiri T, Nguyen MAT, Tran DC, Elbadry MIY, Chonabayashi K, Yoshida Y, Takamatsu H, Ozawa T, Azuma F, Kishi H, Fujii Y, Ogawa S, Tajima A, Nakao S.
  • 雑誌名: Haematologica 巻: － 号: 6 ページ: 247809-247809
  • DOI: 10.3324/haematol.2020.247809
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] Production of a rabbit monoclonal antibody for highly sensitive detection of citrus mosaic virus and related viruses. (2020)
  • 著者名/発表者名: Miyoshi S, Tokunaga S, Ozawa T, Takeda H, Aono M, Miyoshi T, Kishi H, Muraguchi A, Shimizu S, Nozawa A, Sawasaki T.
  • 雑誌名: PloS One 巻: 15 号: 4 ページ: e0229196-e0229196
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0229196
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Effect of Porphyromonas gingivalis infection on gut dysbiosis and resultant arthritis exacerbation in mouse model (2020)
  • 著者名/発表者名: Hamamoto Yuta、Ouhara Kazuhisa、Munenaga Syuichi、Shoji Mikio、Ozawa Tatsuhiko、Hisatsune Jyunzo、Kado Isamu、Kajiya Mikihito、Matsuda Shinji、Kawai Toshihisa、Mizuno Noriyoshi、Fujita Tsuyoshi、Hirata Shintaro、Tanimoto Kotaro、Nakayama Koji、Kishi Hiroyuki、Sugiyama Eiji、Kurihara Hidemi
  • 雑誌名: Arthritis Research & Therapy 巻: 22 号: 1 ページ: 249-249
  • DOI: 10.1186/s13075-020-02348-z
  • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
• [雑誌論文] A novel and simple method to produce large amounts of recombinant soluble peptide/major histocompatibility complex monomers for analysis of antigen-specific human T cell receptors (2019)
  • 著者名/発表者名: Lyu Fulian、Ozawa Tatsuhiko、Hamana Hiroshi、Kobayashi Eiji、Muraguchi Atsushi、Kishi Hiroyuki
  • 雑誌名: New Biotechnology 巻: 49 ページ: 169-177
  • DOI: 10.1016/j.nbt.2018.11.005
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cutting Edge: B cells expressing cyclic citrullinated peptide-specific antigen receptor are tolerized in normal conditions. (2018)
  • 著者名/発表者名: Yamada H, Ozawa T, Kishi H, Okada S, Nakashima Y, Muraguchi A and Yoshikai Y.
  • 雑誌名: J Immunol 巻: 201 号: 12 ページ: 3492-3496
  • DOI: 10.4049/jimmunol.1800826
  • 査読あり
• [雑誌論文] Autoantibodies reactive to PEP08 are clinically related with morbidity and severity of interstitial lung disease in connective tissue diseases. (2018)
  • 著者名/発表者名: Okumura M, Ozawa T, Hamana H, Norimatsu Y, Tsuda R, Kobayashi E, Shinoda K, Taki H, Tobe K, Imura J, Sugiyama E, Kishi H, Muraguchi A.
  • 雑誌名: Eur J Immunol. 巻: 48 号: 10 ページ: 1717-1727
  • DOI: 10.1002/eji.201747381
  • 査読あり
• [雑誌論文] Human monoclonal antibodies against West Nile virus from Japanese encephalitis-vaccinated volunteers. (2018)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Masaki H, Takasaki T, Aoyama I, Yumisashi T, Yamanaka A, Konishi E, Ohnuki Y, Muraguchi A, Kishi H.
  • 雑誌名: Antiviral Res 巻: 154 ページ: 58-65
  • DOI: 10.1016/j.antiviral.2018.04.011
  • 査読あり
• [雑誌論文] Isolation of Antigen-Specific, Antibody-Secreting Cells Using a Chip-Based Immunospot Array (2018)
  • 著者名/発表者名: Kishi Hiroyuki、Ozawa Tatsuhiko、Hamana Hiroshi、Kobayashi Eiji、Muraguchi Atsushi
  • 雑誌名: Methods Mol Biol 巻: 1904 ページ: 147-162
  • DOI: 10.1007/978-1-4939-8958-4_6
  • ISBN: 9781493989577, 9781493989584
• [学会発表] Jurkat細胞を用いたTCRのネオアンチゲン反応性解析 (2020)
  • 著者名/発表者名: 浜名洋, 宮原慶裕, 下岡清美, 祐川健太, 小林栄治, 小澤龍彦, 村口篤, 藤井努, 珠玖洋, 岸裕幸
  • 学会等名: 第24回日本がん免疫学会総会
• [学会発表] ISAAC法を用いたTCR様抗体の迅速作製とその応用 (2020)
  • 著者名/発表者名: 小澤龍彦, 小林栄治, 浜名洋, 村口篤, 岸裕幸
  • 学会等名: 第24回日本がん免疫学会総会
• [学会発表] Development of a novel tumor antigen-specific TCR cloning system using a microarray chip. (2020)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi E, Ozawa T, Hamana H, Muraguchi A, Kishi H.
  • 学会等名: 第24回日本がん免疫学会総会
• [学会発表] 複数のエピトープと結合するモノクローナル抗体の認識機構ークラスター状結晶からの構造解析ー (2020)
  • 著者名/発表者名: 小林淳, 小澤龍彦, 正木秀幸, 加藤龍一
  • 学会等名: 日本結晶学会2020年度年会
• [学会発表] 新規マラリアワクチン候補PfRiprにより誘導されるウサギモノクローナル抗体の評価 (2020)
  • 著者名/発表者名: 徳永聡, 長岡ひかる, 小澤龍彦, 岸裕幸, 村口篤, 坪井敬文, 高島英造, 澤崎達也
  • 学会等名: 第43回日本分子生物学会
• [学会発表] The identification of a common loss-function mutation across different HLA class alleles frequently detected in patients with acquired aplastic anemia. (2019)
  • 著者名/発表者名: Mizumaki H, Hosomichi K, Tanabe M, Yoroidaka T, Imi T, Hosokawa K, Katagiri T, Takamatsu H, Ozawa T, Azuma F, Kishi H, Tajima A, Nakao S.
  • 学会等名: 24th Congress of European Hematology Association
  • 国際学会
• [学会発表] A novel TCR cloning system of peptide-specific T cells using immunospot array assay on a chip(T-ISAAC) technology. (2019)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi E, Ozawa T, Hamana H, Shitaoka K, Muraguchi A, Kishi H.
  • 学会等名: International Conference on Lymphocyte Engineering 2019
  • 国際学会
• [学会発表] エイラクブカを用いた抗Venus VNAR抗体の作製 (2019)
  • 著者名/発表者名: 善家弘貴，武智昭彦，小澤龍彦，宮川拓也，伊東祐二，澤崎達也，竹田浩之
  • 学会等名: 第19回日本蛋白質科学会年会・第71回日本細胞生物学会大会 合同年次大会
• [学会発表] 患者HLA遺伝子導入乳がん細胞株を用いた乳がん患者TIL中の腫瘍反応性TCRの探索 (2019)
  • 著者名/発表者名: 浜名洋，下岡清美，祐川健太，佐伯しおり，長田任一哉，小林栄治，小澤龍彦，藤井努，村口篤，岸裕幸
  • 学会等名: 第23回日本がん免疫学会総会
• [学会発表] 腫瘍浸潤CD8+ T細胞におけるPD-1の発現はTCRレパトアに規定される (2019)
  • 著者名/発表者名: 祐川健太，佐伯しおり，下岡清美，浜名洋，宮原慶裕，小林栄治，長田任一哉，小澤龍彦，藤井努，珠玖洋，村口篤，岸裕幸
  • 学会等名: 第23回日本がん免疫学会総会
• [学会発表] Clonally expanded populations of cytotoxic T cell in TILs and peripheral blood in endometrial cancer patients. (2019)
  • 著者名/発表者名: 津田桂，浜名洋，中島彰俊，森田恵子，津田さやか，島友子，下岡清美，小林栄治，小澤龍彦，村口篤，岸裕幸
  • 学会等名: 第23回日本がん免疫学会総会
• [学会発表] 腫瘍浸潤CD8+ T細胞のTCRとPD-1の発現との関連：大腸癌における考察 (2019)
  • 著者名/発表者名: 岸裕幸，祐川健太，下岡清美，浜名洋，小林栄治，津田桂，長田任一哉，佐伯しおり，小澤龍彦，齋藤滋，藤井努，村口篤
  • 学会等名: 第78回日本癌学会学術総会
• [学会発表] ISAAC法を用いたTCR様抗体の迅速単離法の開発 (2019)
  • 著者名/発表者名: 小澤龍彦，呂福蓮，村口篤，岸裕幸
  • 学会等名: 第42回日本分子生物学会年会
• [学会発表] Cloning of tumor antigen-specific TCRs using immunospot array assay on a chip (T-ISAAC) technology. (2019)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi E, Ozawa T, Hamana H, Shitaoka K, Muraguchi A, Kishi H.
  • 学会等名: 第48回日本免疫学会学術集会
• [学会発表] Screening of tumor-reactive TCRs from TILs of breast cancer patients using a patients' HLA-transduced breast cancer cell line. (2019)
  • 著者名/発表者名: Hamana H, Shitaoka K, Sukegawa K, Saeki S, Nagata T, Kobayashi E, Ozawa T, Fujii T, Muraguchi A, Kishi H.
  • 学会等名: 第48回日本免疫学会学術集会
• [学会発表] TCR repertoire analysis of cytotoxic T cells in tumor-infiltrated lymphocytes and peripheral blood lymphocytes in endometrial cancers. (2019)
  • 著者名/発表者名: Tsuda K, Hamana H, Nakashima A, Tsuda S, Shima T, Shitaoka K, Kobayashi E, Ozawa T, Kishi H.
  • 学会等名: 第48回日本免疫学会学術集会
• [学会発表] Common TCRb repertoire was found in both decidual and peripheral CD8+ T cells in normal term pregnancy. (2019)
  • 著者名/発表者名: Morita K, Kobayashi E, Tsuda S, Shitaoka K, Ozawa T, Hamana H, Saito S, Kishi H.
  • 学会等名: 第48回日本免疫学会学術集会
• [学会発表] ヒト、ウサギ、サメモノクローナル抗体の迅速作製と創薬への応用 (2019)
  • 著者名/発表者名: 小澤龍彦
  • 学会等名: フォーラム富山「創薬」第49回研究会
  • 招待講演
• [学会発表] Human anti-WNV monoclonal antibodies established from JEV-vaccinated volunteers. (2019)
  • 著者名/発表者名: Masaki H, Ozawa T, Takasaki T, Aoyama I, Yumisashi T, Yamanaka A, Konishi E, Muraguchi A, Kishi H.
  • 学会等名: ファーマラボEXPOアカデミックフォーラム
• [学会発表] Isolation of monoclonal anti-CCP antibody from RA patient using ISAAC method and identification of autoantigen of the antibody (2019)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T
  • 学会等名: Antibody Engineering & Therapeutics Asia 2019
  • 国際学会
• [学会発表] Physiological target and molecular evolution of ACPA obtained from RA patients (2018)
  • 著者名/発表者名: Ozawa T, Tsuda R, Hamana H, Kobayashi E, Taki H, Muraguchi A, Kishi H
  • 学会等名: 第47回日本免疫学会学術集会
• [学会発表] The development of antigen detection system using yeast surface display library (2018)
  • 著者名/発表者名: Ohnuki Y, Ozawa T, Hamana H, Kobayashi E, Lyu F, Muraguchi A, Kishi H
  • 学会等名: 第47回日本免疫学会学術集会
• [学会発表] Development of TCR-antigen identification system using “cis-interaction” of TCR and peptide/MHC complex on a T cell (2018)
  • 著者名/発表者名: Yamaguchi S, Kishi H, Shitaoka K, Hamana H, Kobayashi E, Ozawa T, Muraguchi A
  • 学会等名: 第47回日本免疫学会学術集会
• [学会発表] TCR repertoire analysis of peptide-specific T cells using immunospot array assay on a chip (T-ISAAC) technology (2018)
  • 著者名/発表者名: Kobayashi E, Ozawa T, Hamana H, Shitaoka K, Muraguchi A, Kishi H
  • 学会等名: 第47回日本免疫学会学術集会
• [学会発表] A rapid and simple protocol for cDNA cloning of tumor antigen-specific TCR (2018)
  • 著者名/発表者名: Hamana H, Ozawa T, Kobayashi E, Shitaoka K, Muraguchi A, Kishi H
  • 学会等名: 第47回日本免疫学会学術集会
• [学会発表] Loss-of function mutations in HLA-classⅠalleles in acquire aplastic anemia: evidence for the involvement of limited classⅠalleles in the auto-antigen presentation of aplastic anemia (2018)
  • 著者名/発表者名: Mizumaki H, Hosomichi K, Mikoto T, Yoroidaka T, Imi T, Zaimoku Y, Hosokawa K, Katagiri T, Takamatsu H, Ozawa T, Azuma F, Kishi H, Tajima A, Nakano S
  • 学会等名: 60th ASH Annual Meeting and Exposition
  • 国際学会
• [学会発表] 酵母表面ディスプレイ法を用いたTCRの抗原ペプチド/MHCライブラリーの作製とそのスクリーニング (2018)
  • 著者名/発表者名: 小澤龍彦, 大貫燿, 浜名洋, 小林栄治, 呂福蓮, 村口篤, 岸裕幸
  • 学会等名: 第41回日本分子生物学会年会
• [学会発表] 愛媛県産サメを用いた抗Venus VNARの開発と性状解析 (2018)
  • 著者名/発表者名: 善家弘貴, 成田公義, 武智昭彦, 小澤龍彦, 岸本聡, 伊東祐二, 澤崎達也, 竹田浩之
  • 学会等名: 第41回日本分子生物学会年会
• [学会発表] 子宮体癌患者における末梢血CD8T細胞のTCRレパートリー解析 (2018)
  • 著者名/発表者名: 津田桂, 岸裕幸, 中島彰俊, 浜名洋, 牛島明美, 津田さやか, 島友子, 下岡清美, 小林栄治, 小澤龍彦, 吉野修, 齋藤滋
  • 学会等名: 第33回日本生殖免疫学会総会
• [学会発表] 自己免疫性第XIII因子欠乏症例で生じた抗第XIII因子自己抗体のモノクローン化による機能解析 (2018)
  • 著者名/発表者名: 惣宇利正善, 尾崎司, 小澤龍彦, 村口篤, 一瀬白帝
  • 学会等名: 第91回日本生化学会大会
• [産業財産権] TCR様抗体の製造方法およびその利用 (2019)
  • 発明者名: 小澤龍彦、岸裕幸、村口篤
  • 権利者名: 小澤龍彦、岸裕幸、村口篤
  • 産業財産権種類: 特許
  • 産業財産権番号: 2019-202428
  • 出願年月日: 2019