| 研究課題/領域番号 |
18H06126
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| 研究種目 |
研究活動スタート支援
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 審査区分 |
0802:生体の構造と機能およびその関連分野
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| 研究機関 | 滋賀医科大学 |
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研究代表者 |
富松 航佑 滋賀医科大学, 医学部, 特任助教 (00614926)
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| 研究期間 (年度) |
2018-08-24 – 2020-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2018年度)
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| 配分額 *注記 |
2,990千円 (直接経費: 2,300千円、間接経費: 690千円)
2018年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | がんモデル動物 / 非ヒト霊長類 / カニクイザル / がん免疫細胞療法 / iPS細胞 |
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| 研究実績の概要 |
がんの発生は多段階的であり、そのプロセスに関わる遺伝子変異は動物種によって異なる。これまでのがん研究では、主にマウス等のげっ歯類が実験動物として用いられてきたが、マウスの細胞は単一のがん遺伝子変異とがん抑制遺伝子の欠失によってがん化が誘導できるのに対して、ヒトの腫瘍形成には少なくとも４つの遺伝子変異が必要である。また、マウスのがんで効果のある薬剤がヒトでは治療効果を発揮しないなど、マウスで得られた知見がヒトには外挿できない例が多くある為、非ヒト霊長類を用いたがん研究の推進が研究面、治療面共に必要不可欠である。そこで本研究では、薬剤により誘導的に４つのがん遺伝子を発現するがんモデルサルの作製を目的として研究を行った。
ヒトの腫瘍形成に必要な４つの遺伝子(p53を阻害する顕性変異体p53CT、Rb経路による細胞老化を阻害するCDK4、活性化型KRASG12V、テロメラーゼ逆転写酵素TERT) をカニクイザルからPCRで増幅し、ドキシサイクリン (Dox) による発現誘導が可能な形で２つのレンチウイルスベクターに分割して挿入した。このベクターを用いてレンチウイルスを作製し、カニクイザル由来間葉系幹細胞に遺伝子を導入した。ウイルス感染した細胞はGFPとKusabira Orange (KO)を発現する為、これらの陽性細胞をソーティングして実験に用いた。細胞にDoxを添加することで上記した４つの遺伝子の誘導を確認し、遺伝子を誘導することで細胞の足場非依存的な増殖が可能になることを確認した。
上記したレンチウイルスをカニクイザルから取得した卵に感染させ、その後顕微授精を行うことでTg胚を作製した。顕微授精から７日後にGFPとKOの蛍光が観察された胚を仮親に移植し、妊娠個体を取得した。その後、上記した遺伝子が導入されている仔サルの取得に成功した。
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| 現在までの達成度 (段落) |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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| 今後の研究の推進方策 |
平成30年度が最終年度であるため、記入しない。
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