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造血幹細胞移植における、キメラ抗原受容体(CAR)T細胞を用いた新規前処置の開発

研究課題

研究課題/領域番号 18H06231
研究種目

研究活動スタート支援

配分区分補助金
審査区分 0904:生体情報内科学およびその関連分野
研究機関京都大学

研究代表者

新井 康之  京都大学, 医学研究科, 助教 (10826564)

研究期間 (年度) 2018-08-24 – 2020-03-31
研究課題ステータス 完了 (2018年度)
配分額 *注記
2,990千円 (直接経費: 2,300千円、間接経費: 690千円)
2018年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
キーワードキメラ抗原受容体T細胞 / 造血幹前駆細胞
研究実績の概要

そこでCARをコードするRNAを細胞内に導入することで、CAR-T細胞を作成した。これによりCAR発現期間制御と、ドナー幹細胞の生着率向上を得ることを目指した。HSPCマーカーとして、c-kit、sca-1、CD34を選択した。それぞれに対する抗体を産生するハイブリドーマを入手し、抗体可変部位のDNA配列を決定した。CARの骨格構造を含む既報のプラスミドに、新たに同定したDNA配列を挿入し、各CARを発現するプラスミドを作成した。これを用いてin vitroでRNAを合成し、T細胞に注入し、CAR発現の安定性と発現期間を確認した。この結果を踏まえて、健常C57BL/6マウス(Thy1.1/CD45.2)から回収したT細胞を用いて、CAR-T細胞を作成し、健常レシピエントマウス(Thy1.2/CD45.2)に経静脈的に投与した。経時的に末梢血球数や骨髄細胞数、CAR-T細胞数を計測することで、前処置としての有効性を確認できた。

続いて、骨髄ドナーマウス(Thy1.2/CD45.1)から造血幹細胞を回収し、CAR-T細胞で前処置をしたレシピエントマウスに同種移植した。移植後の血球生着を評価し、CAR-T細胞やドナー骨髄細胞の最適な投与量・タイミングについて検討できた。

健常マウス間での移植方法が確立したことを踏まえて、慢性肉芽腫症疾患マウスを用いて、同様の移植を行った。この際、活性酸素産生能など機能的評価を行い、移植効果判定を行った。また、一連の実験においては、骨髄間質に豊富なケモカインに対する受容体(CXCR4)を共発現させ、CAR-T細胞の骨髄への誘導にも成功した。

現在までの達成度 (段落)

平成30年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

平成30年度が最終年度であるため、記入しない。

報告書

(1件)
  • 2018 実績報告書
  • 研究成果

    (3件)

すべて 2018

すべて 雑誌論文 (1件) (うち国際共著 1件、 査読あり 1件) 学会発表 (2件) (うち国際学会 1件)

  • [雑誌論文] Myeloid Conditioning with c-kit-Targeted CAR-T Cells Enables Donor Stem Cell Engraftment2018

    • 著者名/発表者名
      Arai Yasuyuki、Choi Uimook、Corsino Cristina I.、Koontz Sherry M.、Tajima Masaki、Sweeney Colin L.、Black Mary A.、Feldman Steven A.、Dinauer Mary C.、Malech Harry L.
    • 雑誌名

      Molecular Therapy

      巻: 26 号: 5 ページ: 1181-1197

    • DOI

      10.1016/j.ymthe.2018.03.003

    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
    • 査読あり / 国際共著
  • [学会発表] c-kitを標的としたキメラ抗原受容体T細胞(CAR-T)による新規骨髄移植前処置の開発2018

    • 著者名/発表者名
      新井康之, Harry Malech, 髙折晃史
    • 学会等名
      第80回日本血液学会学術集会(大阪)
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
  • [学会発表] Myeloid conditioning with c-kit-targeted CAR-T cells enables donor stem cell engraftment without high-dose chemotherapy or radiation2018

    • 著者名/発表者名
      Yasuyuki Arai, Harry Malech, Akifumi Takaori-Kondo
    • 学会等名
      The 23rd Annual Congress of 2018 Asia-Pacific Blood and Marrow Transplantation Group (Taipei, Taiwan)
    • 関連する報告書
      2018 実績報告書
    • 国際学会

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公開日: 2018-08-27   更新日: 2019-12-27  

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