| 研究課題/領域番号 |
18K06123
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分43030:機能生物化学関連
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| 研究機関 | 国立研究開発法人理化学研究所 |
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研究代表者 |
梅木 伸久 国立研究開発法人理化学研究所, 開拓研究本部, 研究員 (70647502)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2021年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2020年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2019年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2018年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
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| キーワード | 細胞内情報伝達 / シグナル伝達 / 低分子量Gタンパク質 / 細胞増殖 / １分子計測 / 低分子量タンパク質 / 1分子計測 / Ras |
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| 研究実績の概要 |
本年度は、Rasが駆動するERKの細胞膜移行メカニズム解明に取り組んだ。ERKのEGF刺激に伴う細胞膜へのtranslocation dynamics の計測を行った結果、以下のことが明らかとなった。（１）ERK1/ERK2はどちらとも、 EGF刺激により細胞膜へと移行する。さらにこれらの反応は、核への移行よりも早く起こることがわかった。（２）EGF刺激に伴うERKの膜移行シグナルは、EGFRの下流かつRafの上流で起こるものと考えられた。（３）ERKの膜移行に、ERK自身のキナーゼ活性またはN末領域(1-24aa)は必須ではないことがわかった。一方、ERKのC末領域（313-360aa）は膜移行に必須であった。（４）細胞をシアル酸転移酵素阻害剤で処理すると、ERKの膜移行/核移行はどちらともわずかに阻害されることが分かった。（５）ERKの細胞膜上における１分子拡散動体を計測したところ、ほとんどのERK分子はimmobileな状態を保持していた。ERKとactin filament が直接結合するという報告（Leinweberet al.,1999）があることから、actinに結合したERK分子を捉えているものと考えられた。活性型EGFR分子の多くは immobileな状態をとることが知られていることから、活性型のEGFRはERKを介してactinと結合している可能性がある。ERKはシグナル伝達の“反応の足場”として機能するかもしれない。そこでactin/ERK/EGFRの相互作用をin vitroの系で直接捉えるために、actin分子の調製に着手した。actinの昆虫細胞発現系の構築を行い、目的のアクチンタンパク質の発現を確認した。次年度は、H-RasのC末領域をR-RasのC末領域に置換した際の、ERKの上記挙動について解析する予定である。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
新型コロナウイルス蔓延により、当初予定していた実験計画に支障が生じたため。
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| 今後の研究の推進方策 |
余剰資金を活用し、データ解析の自動化を推進する。
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