酵素抗原法のパラフィン切片への応用：病変で作られる抗体の疾患網羅的解析をめざして

• 研究課題/領域番号: 18K07030
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 基金
• 応募区分: 一般
• 審査区分: 小区分49020:人体病理学関連
• 研究機関: 藤田医科大学
• 研究代表者: 水谷 泰嘉 藤田医科大学, 医学部, 助教 (10546229)
• 研究分担者: 塩竈 和也 藤田医科大学, 医療科学部, 講師 (10387699) ; 稲田 健一 藤田医科大学, 医学部, 教授 (70246081) ; 鈴木 元 藤田医科大学, 医学部, 教授 (80236017)
• 研究期間 (年度): 2018-04-01 – 2022-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2021年度)
• 配分額: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円); 2020年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2019年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円); 2018年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
• キーワード: 酵素抗原法 / 形質細胞 / 抗体 / 抗原 / 疾患特異的抗体 / 抗体産生細胞 / パラフィン切片 / 免疫 / 慢性炎症 / 感染症 / がん / パラフィン包埋切片 / 固定

研究成果の概要

本研究では、酵素抗原法のホルマリン固定パラフィン包埋（FFPE）切片への応用を試みた。FFPE切片上の抗体の賦活化法について検討した。その結果、蛋白分解酵素処理が有効であることを確認した。高濃度のプロテイナーゼK処理によって、FFPE切片では50％程度の活性の回復にとどまったが、PFA固定パラフィン包埋切片では抗体活性が凍結切片の80％程度まで回復することを確認した。各種固定法についてパラフィン切片で抗体活性を維持できるか検討した。一部の固定法では、標的抗原の種類に関係なくパラフィン切片でも、抗体活性が維持可能であることが明らかとなった。シグナル増感法についても検証して、その有効性を確認した。

研究成果の学術的意義や社会的意義

複数種の固定法について検討を行い、パラフィン切片で抗体活性を維持可能な固定法が明らかとなった。これは、今後の検体の保管管理の簡便化につながる知見であり、酵素抗原法の応用性を高める知見である。また、FFPE切片における抗原の賦活化法や抗原抗体反応のシグナル増感法、あるいは抗原の標識分子に関する有用性を明らかにすることができた。これらの手法を改良して組み合わせることで、酵素抗原法のFFPE切片への応用が可能となることが期待される。

研究成果

• [雑誌論文] CEBPγ facilitates lamellipodia formation and cancer cell migration through CERS6 upregulation (2021)
  • 著者名/発表者名: Hanxiao Sh, Atsuko Niimi, Toshiyuki Takeuchi, Kazuya Shiogama, Yasuyoshi Mizutani, Taisuke Kajino, Kenichi Inada, Tetsunari Hase, Takahiro Hatta, Hirofumi Shibata, Takayuki Fukui, Toyofumi Fengshi Chen-Yoshikawa, Kazuki Nagano, Takashi Murate, Yoshiyuki Kawamoto, Shuta Tomida, Takashi Takahashi, Motoshi Suzuki
  • 雑誌名: Cancer Science 巻: 未定 号: 7 ページ: 2770-2780
  • DOI: 10.1111/cas.14928
  • 査読あり / オープンアクセス
• [学会発表] AGIAタグ蛋白抗原プローブを用いた酵素抗原法の応用 (2020)
  • 著者名/発表者名: 水谷泰嘉
  • 学会等名: 第109回日本病理学会総会
• [学会発表] 病変組織内の特異的抗体産生細胞を可視化する「酵素抗原法」の技術開発 (2019)
  • 著者名/発表者名: 水谷泰嘉、塩竈和也、竹内俊幸、新美敦子、石 含笑、稲田健一、鈴木 元
  • 学会等名: 第60回日本組織細胞化学会総会・学術集会
• [学会発表] 酵素抗原法によるピロリ菌感染スナネズミにおける抗ピロリ菌抗体産生細胞の局在証明 (2019)
  • 著者名/発表者名: 水谷泰嘉、塩竈和也、竹内俊幸、新美敦子、石 含笑、稲田健一、鈴木 元
  • 学会等名: 第108回日本病理学会総会
• [学会発表] 酵素抗原法の技術開発：標本作製過程が抗体活性におよぼす影響 (2018)
  • 著者名/発表者名: 水谷泰嘉、塩竈和也、竹内俊幸、新美敦子、稲田健一、鈴木元
  • 学会等名: 第59回日本組織細胞化学会総会・学術集会
• [学会発表] 酵素抗原法の技術開発：パラフィン包埋切片において各種固定法が抗体活性におよぼす影響 (2018)
  • 著者名/発表者名: 水谷泰嘉、塩竈和也、尾之内高慶、櫻井浩平、稲田健一、堤 寬
  • 学会等名: 第107会日本病理学会総会
• [学会発表] 酵素抗原法の技術開発：固定条件が抗体活性におよぼす影響 (2018)
  • 著者名/発表者名: 水谷泰嘉、塩竈和也、竹内俊幸、新美敦子、稲田健一、鈴木元
  • 学会等名: 第50回藤田学園医学会