| 研究課題/領域番号 |
18K09799
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分57060:外科系歯学関連
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| 研究機関 | 東京歯科大学 |
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研究代表者 |
菅原 圭亮 東京歯科大学, 歯学部, 講師 (10506926)
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| 研究分担者 |
片倉 朗 東京歯科大学, 歯学部, 教授 (10233743)
折茂 彰 順天堂大学, 医学(系)研究科(研究院), 准教授 (70275866)
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| 研究期間 (年度) |
2018-04-01 – 2021-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2018年度)
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| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2020年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2019年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2018年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | PDXマウス / 舌癌 / 扁平上皮癌 / PDXモデル / 臨床応用 |
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| 研究実績の概要 |
舌癌の外科療法は術後の食事摂取や会話を困難にし、患者の生活の質を著しく低下させる。舌癌悪性化の原因を解 明し新規治療開発に役立てるために、患者舌癌手術検体を用いたpatient-derived tumor xenograft (PDX)モデルを樹立する。
また、舌癌間質に多く存在する癌内線維芽細胞 (CAFs)は癌細胞の浸潤、転移の促進や治療抵抗性獲得に関与しているが、その 分子機構はまだ不明な点が多い。PDXモデルの樹立および癌患者よりのCAFsの抽出を行い、CAFsがヒト乳癌や大腸癌細胞の増殖 、浸潤や転移を促進する事を明らかにした実績がある。申請研究では、患者舌癌由来CAFsを抽出し、舌癌との共移植系PDXモデ ルを確立する。さらにCAFsが口腔癌の浸潤、転移や薬剤抵抗性に与える影響を解明し、CAFsと舌癌の相互作用を媒介する遺伝子 やシグナルを同定し、新規治療法の基礎を確立する。
舌癌PDXモデルの樹立については舌への同所移植を容易にするために患者癌塊をNOGマウスの皮下に移植することを試み、患者舌癌切除検体をマトリゲルとともにNOGマウスの皮下に移植する。同検体より同時にCAFsをprimary culture する。対照の 正常線維芽細胞は舌の非癌部より抽出する。数か月後、皮下で増殖した癌塊をcollagenaseで消化しsingle cell suspension を作製し、新たなNOG マウスの舌部にCAFsあるいは対照線維芽細胞と共に移植する。すでに私達のグループでは大腸がんのPDX モデルの確立に成功し、またすい臓がん検体でも施行し6 例中1 例で腫瘍の増大を認めている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
舌がん組織をマウスに移植する方法を検討している。すでに私達のグループでは大腸がんのPDX モデルの確立に成功し、またすい臓がん検体でも施行し6 例中1 例で腫瘍の増大を認めている。がん組織の確保ができ次第、すでに多臓器がんで成功している条件下でマウスへの移植実験および線維芽細胞の抽出を行う。
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| 今後の研究の推進方策 |
CAFsによる舌癌浸潤・転移促進や治療抵抗性に関するメカニズムの調査：DNAマイクロアレイ解析にて同定された上位5 つの遺伝子の発現をshRNAを用いて抑制する。また、ZEB1およびE-cadherinに対するshRNAを導入した口腔癌PDX由来organoidを 作成し、NOGマウスに移植後、転移の有無を観察する。
EMT誘導転写因子であるZEB1の発現が癌細胞の原発巣よりの局所浸潤や遠隔臓器に播種した癌細胞のtumor initiating ability を維持することに重要であることを推測している。E-cadheri nの発現も遠隔臓器に播種した癌細胞のcolonizationに必須であることを予期している。以上より、CAFsによりE-cadherinおよ びZEB1陽性のpartial EMTを有した癌細胞が誘導され、転移形成能を顕著に亢進することが予期される。
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