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1細胞蛍光検出技術を用いた腫瘍内がん特異的免疫細胞の遺伝子スクリーニング法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 19021050
研究種目

特定領域研究

配分区分補助金
審査区分 理工系
研究機関静岡県立静岡がんセンター(研究所)

研究代表者

秋山 靖人  静岡県立静岡がんセンター(研究所), 免疫治療研究部, 部長 (70222552)

研究分担者 新垣 篤史  国立大学法人東京農工大学, 大学院・共生科学技術研究院, 助教 (10367154)
清原 祥夫  静岡県立静岡がんセンター病院, 皮膚科, 部長 (70205037)
研究期間 (年度) 2007 – 2008
研究課題ステータス 完了 (2008年度)
配分額 *注記
5,100千円 (直接経費: 5,100千円)
2008年度: 2,600千円 (直接経費: 2,600千円)
2007年度: 2,500千円 (直接経費: 2,500千円)
キーワード1細胞蛍光検出 / 免疫細胞 / 遺伝子クローニング / 遺伝子スクリーニング
研究概要

平成20年度は,これまでに行ってきた1細胞レベルでの免疫細胞の検出および免疫関連遺伝子クローニング技術の精度と効率を向上させることを目的とした技術的な改良を継続して行っている。1個のB細胞から遺伝子クローニングを行う場合、特異的なIgG抗体を持つB細胞を同定する染色法の精度とPCR法による1細胞遺伝子増幅の効率に問題点があった。最初のB細胞の染色同定の精度については、GST標識組換えタンパク+Alexa標識抗GST抗体およびPE標識抗ヒトIgG抗体の使用にて改善された。次に1細胞遺伝子増幅の効率については、RTの簡略化、2段階(nested)PCR法などの工夫により、PCR増幅の効率が改善された。抗体遺伝子は、IgH(IgG)鎖遺伝子のPCR増幅に成功した同一の1細胞より同様にIgL(IgG)鎖遺伝子の増幅を行った。当初Primary B細胞の抗体遺伝子の増幅は従来法では困難であったが、この技術改良により不死化をしていない通常のB細胞1個からも抗体遺伝子クローニングが可能となった。IgG抗体遺伝子のコピー数を評価できるリアルタイム定量PCR法では、EBウイルスにて不死化したB細胞においてIgG抗体遺伝子は、通常のB細胞に比べて10倍以上のコピー数の増幅(平均110/細胞)が確認された。Primary B細胞の1細胞あたりの抗体遺伝子コピー数は、10個以下と考えられた。さらに本年度は、抗体遺伝子を取得する症例を選別するため、抗原特異的な血清抗体価を定量・標準化する測定技術を開発し、あらかじめ標的となる抗原に対する抗体価の高い症例由来のB細胞を利用することが可能となっている。これらの基盤技術を活用し、得られたヒト抗体遺伝子配列より組み換え抗体を作製し、抗体の機能的な評価を行う予定である。

報告書

(2件)
  • 2008 実績報告書
  • 2007 実績報告書
  • 研究成果

    (28件)

すべて 2009 2008 2007

すべて 雑誌論文 (9件) (うち査読あり 9件) 学会発表 (13件) 産業財産権 (6件)

  • [雑誌論文] Characterization of a MAGE-1-derived HLA-A24 Epitope-specific CTL Line from a Japanese Metastatic Melanoma Patient2009

    • 著者名/発表者名
      Akiyama Y et al.
    • 雑誌名

      Anticancer Res 29

      ページ: 647-656

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Magnetic separation of melanoma-specific cytotoxic T lymphocytes from a vaccinated melanoma patient using MHC/peptide complex-conjugated bacterial magnetic particles2009

    • 著者名/発表者名
      Takahashi M, Akiyama Y et al.
    • 雑誌名

      Bioconjugate Chem 20

      ページ: 304-309

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Disrupting actin filaments ptomotes efficient transfection of a leukemic cell line using cell adhesive protein-embedded carbonate apatite particles2009

    • 著者名/発表者名
      Kutsuzawa K, Akiyama Y et al.
    • 雑誌名

      Anal Biochem (印刷中)

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Supporting information for: high-density microcavity array for cell detection: single-cell analysis of hematopoietic stem cells in peripheral blood mononuclear cells2009

    • 著者名/発表者名
      Hosokawa M, Arakaki A et al.
    • 雑誌名

      Anal Chem (印刷中)

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Novel approach to the characterization of melanoma associated-peptide-specific CTL lines from Japanese metastatic melanoma patients2008

    • 著者名/発表者名
      Akiyama Y et al.
    • 雑誌名

      Int J Oncol 33

      ページ: 433-442

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Preparation of human immune T Cells containing iron-oxide nanoparticles for magnetically mediated immunotherapy2008

    • 著者名/発表者名
      Iida H, Akiyama Y et al.
    • 雑誌名

      Biotecnol Bioeng 101(6):1123-1128,2008 101

      ページ: 1123-1128

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Efficient transfection of mouse embryonic stem cells with cell-adhesive protein-embedded inorganic nanocarrier2008

    • 著者名/発表者名
      Kutsuzawa K, Akiyama Y et al.
    • 雑誌名

      Anal Biochem 372

      ページ: 122-124

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Changes in the expression of CDユ06,osteogenic genes,and transcriptionfactors involved in the osteogenic differentiation of human bone marrormesenchymal stem cells2008

    • 著者名/発表者名
      Liu F, Akiyama Y, et. al.
    • 雑誌名

      J Bone Miner Metab 26

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Protein kinase C activation enhances transfection efficacy of cell-adhesive protein-anchored carbonate apatite nanocrystals2007

    • 著者名/発表者名
      Kutsuzawa K, Akiyama Y, et. al.
    • 雑誌名

      Anal Biochem 371

      ページ: 116-117

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] Single cell-based characterization of cancer-specific immuno-biomarker genes2009

    • 著者名/発表者名
      秋山靖人 他
    • 学会等名
      International Workshop HITS 2009
    • 発表場所
      東京工大、横浜
    • 年月日
      2009-02-05
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] Development of single cell-based screening method for cancer-specific immune cell-related genes2009

    • 著者名/発表者名
      秋山靖人 他
    • 学会等名
      International Life Surveyor Symposium
    • 発表場所
      日立中央研究所、東京
    • 年月日
      2009-01-29
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] Gene expression analysis from sngle-cell by using microfluidic device equipped with micromesh2009

    • 著者名/発表者名
      新垣篤史 他
    • 学会等名
      International Life Surveyor Symposium
    • 発表場所
      日立中央研究所、東京
    • 年月日
      2009-01-29
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] プロテオミクス解析によるメラノーマ特異的な血清学的マーカーの同定2008

    • 著者名/発表者名
      瀧川雅子、秋山靖人 他
    • 学会等名
      第67回日本がん学会総会
    • 発表場所
      名古屋市
    • 年月日
      2008-10-29
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] Development of single cell-based screening method for cancer-specific immune cell-related genes2008

    • 著者名/発表者名
      秋山靖人
    • 学会等名
      Prof. Michael Nobel Symposium
    • 発表場所
      静岡がんセンター研究所
    • 年月日
      2008-09-24
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 1細胞蛍光検出技術を用いたがん特異的免疫細胞の遺伝子スクリーニング法の開発2008

    • 著者名/発表者名
      秋山靖人 他
    • 学会等名
      文科省特定領域研究班第6回シンポジウム
    • 発表場所
      大阪大学
    • 年月日
      2008-06-27
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] bPETマイクロメッシュを用いた単一免疫細部からの遺伝子発現解析法2008

    • 著者名/発表者名
      新垣篤史 他
    • 学会等名
      文科省特定領域研究班第6回シンポジウム
    • 発表場所
      大阪大学
    • 年月日
      2008-06-27
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] bPETマイクロメッシュを用いた単一免疫細胞からの遺伝子発現解析法の開発2008

    • 著者名/発表者名
      大屋 香織、新垣 篤史, 他
    • 学会等名
      電気化学会第75回大会
    • 発表場所
      山梨大学
    • 年月日
      2008-03-31
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] バイオマーカーとしての生体内免疫応答の解析2007

    • 著者名/発表者名
      秋山 靖人, 他
    • 学会等名
      東海大学クリニカルバイオメデイカルマスターコースシンポジウム
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2007-09-13
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] Development of single cell-based screening method for cancer-specificimmune cell-related genes2007

    • 著者名/発表者名
      Akiyama Y, Arakaki A, et. al.
    • 学会等名
      The 2nd international workshop on approaches to single-cell analysis
    • 発表場所
      早稲田大学(東京)
    • 年月日
      2007-09-06
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] マイクロメッシュを用いた1細胞分離技術の開発2007

    • 著者名/発表者名
      新垣 篤史, 他
    • 学会等名
      特定領域ライフサーベイヤシンポジウム
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2007-06-05
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] 免疫療法の基盤技術の開発と臨床応用への展開2007

    • 著者名/発表者名
      秋山 靖人, 他
    • 学会等名
      平成19年度都市エリア発展型研究成果発表会
    • 発表場所
      静岡県沼津市
    • 年月日
      2007-03-04
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] 1細胞蛍光検出技術を用いたがん特異的免疫細胞の遺伝子スクリーニング法の開発2007

    • 著者名/発表者名
      秋山 靖人, 他
    • 学会等名
      文科省特定領域研究班領域班シンポジウム
    • 発表場所
      名古屋大
    • 年月日
      2007-01-31
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [産業財産権] ELISA法を用いたヒト血清中の抗原特異的なIgG抗体力価測定の標準化法2009

    • 発明者名
      秋山靖人,飯塚明
    • 権利者名
      静岡県
    • 出願年月日
      2009-03-31
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [産業財産権] プロテオミクス解析を用いたメラノーママーカーの同定2008

    • 発明者名
      秋山靖人,瀧川雅子
    • 権利者名
      静岡県
    • 産業財産権番号
      2008-149728
    • 出願年月日
      2008-06-06
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [産業財産権] T細胞レセプターβ鎖遺伝子およびα鎖遺伝子2008

    • 発明者名
      秋山靖人丸山宏二
    • 権利者名
      静岡県
    • 産業財産権番号
      2008-008755
    • 出願年月日
      2008-01-18
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [産業財産権] ヒトー本鎖抗体遺伝子断片の効率的な新規調整法2007

    • 発明者名
      秋山靖人丸山宏二
    • 権利者名
      静岡県
    • 産業財産権番号
      2007-092968
    • 出願年月日
      2007-03-30
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [産業財産権] 1細胞レベルでめ抗体遺伝子の解析・同定方法2007

    • 発明者名
      秋山靖人
    • 権利者名
      静岡県
    • 産業財産権番号
      2007-147525
    • 出願年月日
      2007-06-01
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [産業財産権] 1細胞レベルでのT細胞抗原レセプター遺伝子の解析・同定方法2007

    • 発明者名
      秋山靖人松永是新垣篤史
    • 権利者名
      静岡県
    • 産業財産権番号
      2007-176683
    • 出願年月日
      2007-07-04
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書

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公開日: 2007-04-01   更新日: 2018-03-28  

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