| 研究課題/領域番号 |
19590602
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
衛生学
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| 研究機関 | 日本医科大学 |
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研究代表者 |
李 卿 日本医科大学, 医学部, 講師 (50250048)
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| 研究分担者 |
川田 智之 日本医科大学, 大学院・医学研究科, 教授 (00224791)
稲垣 弘文 日本医科大学, 医学部, 講師 (50213111)
平田 幸代 日本医科大学, 医学部, 助教 (40322515)
佐藤 茂 日本医科大学, 医学部, 講師 (10125073)
石崎 正通 日本医科大学, 医学部, 准教授 (40096954)
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| 研究期間 (年度) |
2007 – 2009
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| 研究課題ステータス |
完了 (2009年度)
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| 配分額 *注記 |
4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
2009年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2008年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2007年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | 環境中毒 / 有機リン農薬 / アポトーシス / Fenitrothion / Flow cytometry / T細胞 / NK細胞 / 脾細胞 / 形態学 / JurkatT細胞 / Chlorpyrifos / 免疫細胞 / Caspase-3 / DNA ladder / FITC-Annexin V / ナチュラル・キラー細胞 / DDVP |
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| 研究概要 |
これまで申請者らは、有機リン農薬がGranule exocytosis pathway及びFas ligand/Fas pathwayの両方を障害することによってNK,CTL及びLAK活性を抑制することを明らかにした。しかし、これだけでは有機リン農薬によるNK活性低下の機序を十分に説明しきれず、他の機序も関与していることが示唆されている。そこで、我々は有機リン農薬による免疫細胞のアポトーシスに着目し、有機リン農薬によるNKとT細胞のアポトーシス及びその機序を検討した。また有機リン農薬が生体内で代謝されるので、生体内(In vivo)においても有機リン農薬が免疫担当細胞のアポトーシスを誘導するかどうか、も検討した。アポトーシスの測定は、FITC-Annexin Vを用いて有機リン農薬によるNKとT細胞の早期アポトーシスを測定した。またDNA ladder及び細胞内活性化Caspase-3も測定した。
その結果、DDVPまたはChlorpyrifosはいずれも用量依存的・処理時間依存的にNK92CI、NK92MI及びT細胞のアポトーシスを誘導することが明らかとなった。25ppm以上の濃度ではChlorpyrifosがDDVPより早くNK92CIのアポトーシスを誘導するが、一方で、12.5～1.56ppmの低濃度域においてはDDVPがChlorpyrifosより強くアポトーシスを誘導することが明らかとなった。その違いは不明であるが、それぞれの毒性及び水溶性の違いと関連があるかもしれない。DDVPとChlorpyrifosに対する反応性においてNK92CIはNK92MIより感受性が高いことが判明した。これはDDVPによるNK92CI活性抑制がDDVPによるNK92MI活性抑制より強いことと関連があると示唆された。
またChlorpyrifosまたはDDVPは用量・処理時間依存的にNKとT細胞内の活性化Caspase-3のレベルを上昇させることが明らかとなった。さらにCaspase-3阻害剤が有意にChlorpyrifosまたはDDVPによるアポトーシスを抑制できることから、ChlorpyrifosまたはDDVPによるヒトNKとT細胞のアポトーシスは細胞内のCaspase-3活性化を介して誘導したことが判明した。
In vivo実験ではFNTが量依存的に脾細胞中のCD8陽性T細胞を減少させ、高投与群のCD8陽性T細胞が対照群より有意に減少したことが明らかとなった。一方、CD4とCD3陽性細胞では各群の間に有意差が認められなかった。MNPの高投与群ではCD3とCD8陽性T細胞が共に対照群より有意に減少したことが明らかとなった。一方、CD4陽性細胞において各群の間に有意差が認められなかった。FNTが量依存的に脾臓重量、体重及び脾臓と体重の比を有意に減少させ、脾臓重量、体重及び脾臓と体重の比においていずれもFNT高投与群が対照群より有意に低いことが明らかとなった。FNT及びMNPは、脾細胞中のB細胞、NK細胞及びマクロファージへの影響は認められなかった。電子顕微鏡ではFNT投与群の脾臓にアポトーシス細胞が検出された。
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