C型肝炎ウイルス複製に関与する宿主因子の同定とウイルス複製機構の解析

• 研究課題/領域番号: 19590799
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器内科学
• 研究機関: 国立感染症研究所
• 研究代表者: 相崎 英樹 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (00333360)
• 研究分担者: 鈴木 哲朗 国立感染研究所, ウイルス第二部, 室長 (00250184)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2008
• 研究課題ステータス: 完了 (2008年度)
• 配分額: 4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円); 2008年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円); 2007年度: 2,730千円 (直接経費: 2,100千円、間接経費: 630千円)
• キーワード: C型肝炎ウイルス / 複製複合体 / プロテオミックス / レプリコン / creatine kinase B / 界面性剤不溶性膜分画 / 脂質ラフト / サブゲノムレプリ / 界面活性剤不溶性膜分画 / 分子シャペロン / NS5B蛋白

研究概要

HCVは感染細胞内でウイルス蛋白と宿主因子からなる複製複合体を形成し効率良くウイルス複製を行っていると考えられている。本研究はプロテオミックス技術により、HCV複製複合体(RC)を構成する宿主因子を同定し、その機能を解析することを目的とした。
サブゲノムレプリコン(genotype 1b)を有するHuh7細胞からHCVRCを含む界面活性剤不溶性膜分画を抽出し、Huh7細胞と比較したところ、の結果、約1500個の蛋白が検出され、62個がレプリコン細胞で2倍以上蛋白量が増加しており、それらはHeat shock protein、Chaperone、Enzyme、Receptor signaling complex、Ubiquitin proteasome system proteinなどに分類された。
HCV複製複合体を構成する宿主因子として、細胞内のATP輸送、ATP/ADP濃度調節に働くcreatine kinase B(CKB)を同定した。遺伝子型1b及び2a由来のHCVレプリコン細胞において、CKB遺伝子のノックダウン、dominant negative CKBの強制発現あるいはCKB阻害剤cyclocreatine処理によりHCV RNA複製の有意な抑制が観察されCKBがHCV RNA複製調節に関与することが明らかとなった。さらに、セミインタクト細胞を用いたHCV replicaseアッセイ系において、CKB添加によりHCV複製が亢進されることを見出した。

研究成果

• [雑誌論文] SYNCRIP (synaptotagmin-binding, cytoplasmic RNA-interacting protein) is a host factor involved in hepatitis C virus RNA replication (2009)
  • 著者名/発表者名: Liu HM, Aizaki H, Choi KS, Machida K, Ou JJ, Lai MM.
  • 雑誌名: Virology 386 ページ: 249-56
  • 査読あり
• [雑誌論文] Involvement of creatine kinase B in hepatitis C virus genome replication through interaction with the viral NS4A protein (2009)
  • 著者名/発表者名: Hara H, Aizaki H, Matsuda M, Shinkai-Ouchi F, Inoue Y, Murakami K, Shoji I, Kawakami H, Matsuura Y, Lai MM, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T.
  • 雑誌名: J Virol. 84 ページ: 5137-47
  • 査読あり
• [雑誌論文] Proteasomal turnover of hepatitis C virus core protein is regulated by two distinct mechanisms : ubiquitin-dependent and ubiquitin-independent but PA2 8gamma-dependent (2009)
  • 著者名/発表者名: Suzuki, R., Moriishi, K., Fukuda, K., Shirakura, M., Ishii, K., Wakita T., Miyamura, T., Matsuura, Y., Suzuki, T.
  • 雑誌名: J. Virol. 83 ページ: 2389-2392
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cellular vimentin content regulates the protein level of Hepatitis C virus core protein and the Hepatitis C virus production in cultured cells (2009)
  • 著者名/発表者名: Nitahara-Kasahara Y, Fukasawa M, Shinkai-Ouchi F, Sato S, Suzuki T, Murakami K, Wakita T, Hanada K, Miyamura T, Nishijima M.
  • 雑誌名: Virology 383 ページ: 319-327
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Critical Role of Virion-Associated Cholesterol and Sphingolipid in Hepatitis C Virus Infection (2008)
  • 著者名/発表者名: Aizaki H, Morikawa K, Fukasawa M, Hara H, Inoue Y, Tani H, Saito K, Nishijima M, Hanada K, Matsuura Y, Lai MM, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T.
  • 雑誌名: J Virol. 82 ページ: 5715-24
  • 査読あり
• [雑誌論文] Dynamic behavior of hepatitis C virus quasispecies in a long-term culture of the three-dimensional radial-flow bioreactor system (2008)
  • 著者名/発表者名: Murakami K, Inoue Y, Hmwe SS, Omata K, Hongo T, Ishii K, Yoshizaki S, Aizaki H, Matsuura T, Shoji I, Miyamura T. Suzuki T
  • 雑誌名: J Virol Methods 148 ページ: 174-181
  • 査読あり
• [雑誌論文] Interaction of hepatitis C virus nonstructural protein 5A with core protein is critical for the production of infectious virus particles (2008)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Suzuki R, Murakami K, Aizaki H, Ishii K, Murayama A, Date T, Matsuura Y, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T.
  • 雑誌名: J Virol. 82 ページ: 7964-76
  • 査読あり
• [雑誌論文] Characterzation of infectious hepatitis C virus from liver-derived cell lines (2008)
  • 著者名/発表者名: Akazawa D, Date T, Morikawa K, Murayama A, Omi N, Takahashi H, Nakamura N, Ishii K, Suzuki T, Mizokami M, Mochizuki H, Wakita T.
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 377 ページ: 747-751
  • 査読あり
• [雑誌論文] Trans-encapsidation of hepatitis C virus subgenomic replicon RNA with viral structure proteins (2008)
  • 著者名/発表者名: Ishii, K., Murakami, K., Hmwe, SS., Bin, Z., Li, J., Shirakura, M., Morikawa, K., Suzuki, R., Miyamura, T., Wakita, T., Suzuki, T.
  • 雑誌名: Biochem. Biophys. Res. Commun. 371 ページ: 446-450
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intramembrane processing by signal peptide peptidase regulates the membrane localization of hepatitis C virus core protein and viral propagation (2008)
  • 著者名/発表者名: Okamoto K., Mori Y., Komoda Y., Okamoto T., Okochi M., Takeda M., Suzuki T., Moriishi K., Matsuura Y.
  • 雑誌名: J. Virol. 82 ページ: 8349-8361
  • 査読あり
• [雑誌論文] A single amino acid mutation in hepatitis C virus NS5A disrupting FKBP8 interaction impairs viral replication (2008)
  • 著者名/発表者名: Okamoto T., Omori H., Kaname Y., Abe T., Nishimura Y., Suzuki T., Miyamura T., Yoshimori T., Moriishi K., Matsuura Y.
  • 雑誌名: J. Virol. 82 ページ: 3480-3489
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification and characterization of the human inhibitor of caspase-activated DNase gene promoter (2008)
  • 著者名/発表者名: Omata, K., Suzuki, R., Masaki, T., Miyamura, T., Satoh, T., Suzuki, T.
  • 雑誌名: Apoptosis 13 ページ: 929-937
  • 査読あり
• [雑誌論文] Virological characterization of HCV JFH-1 strain in lymphocytic cell lines (2008)
  • 著者名/発表者名: Murakami, K., Kimura, T., Osaki, M., Ishii, K., Miyamura, T., Suzuki, T., Wakita, T., Shoii, I.
  • 雑誌名: J. Gen. Virol. 89 ページ: 1587-1592
  • 査読あり
• [雑誌論文] ヒト肝癌細胞の三次元培養化に伴う遺伝子発現変動の網羅的解析 (2008)
  • 著者名/発表者名: 葛岡健太郎, 岩田耕一郎, 吉崎佐矢香, 相崎英樹, 鈴木哲朗, 長尾垣
  • 雑誌名: 東京医大誌 66 ページ: 212-223
  • NAID: 10024169293
  • 査読あり
• [雑誌論文] (2008)
  • 著者名/発表者名: 鈴木哲朗, 政木隆博, 相崎英樹
  • 雑誌名: ウイルス(日本ウイルス学会)
• [雑誌論文] (2008)
  • 著者名/発表者名: Aizaki H, Suzuki T.
  • 雑誌名: Structure-based Study of Viral Replication(World Scientific)
• [雑誌論文] A Critical Role of Virion-Associated Cholesterol and Sphingolipid in Hepatitis C Virus Infection (2008)
  • 著者名/発表者名: Aizaki H, Morikawa K, Fukasawa M, Hara H, Inoue Y, Tani H, Saito K, Nishijima M, Hanada K, Matsuura Y, Lai MM, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T.
  • 雑誌名: J Virol. (In press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Dynamic behavior of hepatitis C virus quasispecies in a long-term culture of the three-dimensional radial-flow bioreactor system. (2008)
  • 著者名/発表者名: Murakami K, Inoue Y, Hmwe SS, Omata K, Hongo T, Ishii K, Yoshizaki S, Aizaki H, Matsuura T, Shoji I, Miyamura T, Suzuki T
  • 雑誌名: J Virol Methods 148 ページ: 174-181
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Single Amino Acid Mutation in Hepatitis C Virus NS5A Disrupting FKBP8 Interaction Impairs Viral Replication. (2008)
  • 著者名/発表者名: Okamoto T, Omori H, Kaname Y, Abe T, Nishimura Y, Suzuki T, Miyamura T, Yoshimori T, Moriishi K, Matsuura Y.
  • 雑誌名: J. Virol. 82 ページ: 3480-3489
  • 査読あり
• [雑誌論文] Trans-encapsidation of hepatitis C virus subgenomic replicon RNA with viral structure proteins. (2008)
  • 著者名/発表者名: Ishii K, Murakami K, Hmwe SS, Zhang B, Li J, Shirakura M, Morikawa K, Suzuki R, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun. (In press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Transcriptomic comparison of human hepatoma Huh-7 cell clones with different hepatitis C virus replication efficiencies. (2007)
  • 著者名/発表者名: Inoue Y, Murakami K, Hmwe SS, Aizaki H, Suzuki T.
  • 雑誌名: Jpn J Infect Dis. 60 ページ: 173-178
  • 査読あり
• [雑誌論文] Hepatitis C viral life cycle. (2007)
  • 著者名/発表者名: Suzuki T, Ishii K, Aizaki H, Wakita T
  • 雑誌名: Adv Drug Deliv Rev 59 ページ: 1200-1212
• [雑誌論文] Molecular biology of hepatitis C virus. (2007)
  • 著者名/発表者名: Suzuki T., Aizaki H, Murakami K, Shoji I, Wakita T
  • 雑誌名: J Gastroenterol 42 ページ: 411-423
  • NAID: 40016676275
• [雑誌論文] Human Butyrate-Induced Transcript 1 Interacts with Hepatitis C Virus NS5A and Regulates Viral Replication. (2007)
  • 著者名/発表者名: Taguwa S, Okamoto T, Abe T, Mori Y, Suzuki T, Moriishi K, Matsuura Y.
  • 雑誌名: J. Virol. 82 ページ: 2631-2641
  • 査読あり
• [雑誌論文] E6AP ubiquitin ligase mediates ubiquitylation and degradation of hepatitis C virus core protein. (2007)
  • 著者名/発表者名: Shirakura M, Murakami K, Ichimura T, Suzuki R, Shimoji T, Fukuda K, Abe K, Sato S, Fukasawa M, Yamakawa Y, Nishijima M, Moriishi K, Matsuura Y, Wakita T, Suzuki T, Howley PM, Miyamura T, Shoji I.
  • 雑誌名: J. Virol. 81 ページ: 1174-1185
  • 査読あり
• [雑誌論文] Involvement of the PA28gamma-dependent pathway in insulin resistance induced by hepatitis C virus core protein. (2007)
  • 著者名/発表者名: Miyamoto H, Moriishi K, Moriya K, Murata S, Tanaka K, Suzuki T, Miyamura T, Koike K, Matsuura Y.
  • 雑誌名: J. Virol. 81 ページ: 1727-1735
  • 査読あり
• [雑誌論文] Critical role of PA28gamma in hepatitis C virus-associated steatogenesis and hepatocarcinogenesis. (2007)
  • 著者名/発表者名: Moriishi K, Mochizuki R, Moriya K, Miyamoto H, Mori Y, Abe T, Murata S, Tanaka K, Miyamura T, Suzuki T, Koike K, Matsuura Y.
  • 雑誌名: Proc.Natl.Acad.Sci.USA. 104 ページ: 1661-1666
  • 査読あり
• [雑誌論文] GBV-B as a pleiotropic virus:distribution of GBV-B in extrahepatic tissues in vivo. (2007)
  • 著者名/発表者名: Ishii K, lijima S, Kimura N, Lee Y, J, Ageyama N, Yagi S, Yamaguchi K, Maki N, Mori K, Yoshizaki S, Machida S, Suzuki T, Iwata N, Sata T, Terao K, Miyamura T, Akari H.
  • 雑誌名: Microbes Infect. 9 ページ: 515-521
  • 査読あり
• [雑誌論文] Rapid genome sequencing of RNA viruses. (2007)
  • 著者名/発表者名: Mizutani T, Endoh D, Shirato K, Shimizu H, Fukushi S, Saijo M, Sakai K, Kwang L, Ito M, Nerome R, Takasaki T, Ishii K, Suzuki T, Kurane I, Morikawa S, Nishimura H.
  • 雑誌名: Emerg.Infect.Dis. 13 ページ: 322-324
  • NAID: 120005761147
  • 査読あり
• [雑誌論文] The NS3 helicase and NS5B-to-3'X regions are important for efficient hepatitis C virus strain JFH-1 replication in Huh7 cells. (2007)
  • 著者名/発表者名: Murayama A, Date T, Morikawa K, Akazawa D, Miyamoto M, Kaga M, Ishii K, Suzuki T, Kato T, Mizokami M, Wakita T.
  • 雑誌名: J.Virol. 81 ページ: 8030-8040
  • 査読あり
• [学会発表] Interaction of hepatitis C virus nonstructural protein 5A with core protein is critical for the production of infectious virus particles (2008)
  • 著者名/発表者名: Suzuki T.
  • 学会等名: The 50th Anniversary Meeting of the International Association for the Study of the Liver
  • 発表場所: San Francisco, USA
• [学会発表] Involvement of creatine kinase B in hepatitis C virus genome replication through interaction with the viral NS4A protein (2008)
  • 著者名/発表者名: Hara H, Aizaki H, Matsuda M, Murakami K, Shoji I, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T.
  • 学会等名: 15th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: SanAntonio, USA
• [学会発表] The C-terminal serine of NS5A is a determinant of NS5A-core protein interaction and HCV production (2008)
  • 著者名/発表者名: Masaki R, Suzuki R, Murakami K, Aizaki H, Ishii K Miyamura T, Wakita T, Suzuki T.
  • 学会等名: 15th International Symposium on Hepatitis C Virus and Related Viruses.
  • 発表場所: SanAntonio, USA
• [学会発表] Critical roles of virion-associated cholesterol and sphingolipids in the viral infectivity. (2007)
  • 著者名/発表者名: Aizaki H, Suzuki T, et. al.
  • 学会等名: 14^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Glasgow,UK
• [学会発表] Analysis of NS5A region for hepatitis C virus particle production. (2007)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Suzuki T, et. al.
  • 学会等名: 14^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Glasgow,UK
• [学会発表] Cellular vimentin content affects the protein level of hepatitis C virus core protein and the activity of hepatitis C virus production in cultured cells. (2007)
  • 著者名/発表者名: Fukasawa M, Suzuki T, et. al.
  • 学会等名: 14^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Glasgow,UK
• [学会発表] An adaptive mutation in E2 glycoprotein allows an efficient production of HCV particles with the epitope-tagged envelope. (2007)
  • 著者名/発表者名: Takahashi H, Suzuki T, et. al.
  • 学会等名: 14^<th> International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Glasgow,UK
• [学会発表] The cholesterol and sphingolipids of hepatitis C virus particles play critical roles in the viral infectivity (2007)
  • 著者名/発表者名: Aizaki H, Fukasawa M, et. al.
  • 学会等名: The 58^<th> annual meeting of the American association for the study of liver diseases
  • 発表場所: Boston
• [学会発表] Analysis of NS5A region important for hepatitis C virus particle production. (2007)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Suzuki T, et. al.
  • 学会等名: The 58^<th> annual meeting of the American association for the study of liver diseases
  • 発表場所: Boston
• [学会発表] Production of infectious hepatitis C virus by using RNA polymerase I-mediated transcription. (2007)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Suzuki T, et. al.
  • 学会等名: 第66回日本癌学会学術総会
  • 発表場所: 横浜
• [学会発表] 脂質のC型肝炎ウイルス感染、粒子形成における役割 (2007)
  • 著者名/発表者名: 相崎 英樹、原弘 道、森川 賢一、宮村 達男、脇田 隆字、鈴木 哲朗
  • 学会等名: 第43回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] 遺伝子型2a/2b間でのキメラウイルスの作製および性状解析 (2007)
  • 著者名/発表者名: 伊達 朋子、鈴木 哲朗, 他
  • 学会等名: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] C型肝炎ウイルスコア蛋白質のシグナルペプチドペプチダーゼによるプロセシングの生物学的意義. (2007)
  • 著者名/発表者名: 森 嘉生、鈴木 哲朗, 他
  • 学会等名: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] HCV JFH-1株の複製および感染性ウイルス粒子形成に重要な領域の解析 (2007)
  • 著者名/発表者名: 村山 麻子、鈴木 哲朗, 他.
  • 学会等名: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] HCVコア蛋白と結合する新規宿主因子hnRNP H1/H2の同定と相互作用解析 (2007)
  • 著者名/発表者名: 阿部 克俊、鈴木 哲朗, 他
  • 学会等名: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] 新規阻害剤探索のためのHCV感染増殖アッセイ系の構築とその評価 (2007)
  • 著者名/発表者名: 上西 理恵、鈴木 哲朗, 他
  • 学会等名: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] 細胞培養系により産生されたHCVウイルスの免疫原性に関する検討 (2007)
  • 著者名/発表者名: 尾見 法昭、鈴木 哲朗, 他
  • 学会等名: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] C型肝炎ウイルス脂質成分の感染における役割 (2007)
  • 著者名/発表者名: 相崎 英樹、鈴木 哲朗, 他
  • 学会等名: 第55回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 札幌
• [図書] C型肝炎に関する最近の情報 (2008)
  • 著者名/発表者名: 相崎 英樹、鈴木 哲朗、多田 有希、岡部 信彦、脇田 隆字
  • 出版者: 結核予防会機関誌「複十字」