| 研究課題/領域番号 |
19591140
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
血液内科学
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| 研究機関 | 東京医科大学 |
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研究代表者 |
田内 哲三 東京医大, 医学部, 准教授 (80281377)
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| 研究分担者 |
黒田 雅彦 東京医科大学, 医学部, 准教授 (80251304)
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| 研究期間 (年度) |
2007 – 2009
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| 研究課題ステータス |
完了 (2009年度)
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| 配分額 *注記 |
4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円)
2009年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2008年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2007年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
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| キーワード | BCR-ABL / 耐性化 / DNA修復 / Auroraキナーゼ / Dasatinib / Srcキナーゼ |
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| 研究概要 |
1)Saturation mutagenesis screenを用いたABLキナーゼ阻害剤の耐性化機序の解析:pMSCVレトロウイルスベクターにp210BCR-ABL cDNAを組み込み、mutS-,mutD5-,musT-E.coliをトランスフォームする。プラスミドDNAを精製後、ecotropic packaging cell line GP86にリン酸カルシウム沈降法を用いてトランスフェクトし10^5CFU/ml以上の高力価ウイルスを作成する。次にBCR-ABL cDNAにランダムに変異の入ったレトロウイルスベクターをIL-3依存性細胞株BaF3に感染させ、(1)Nilotinib、(2)AUY922、(3)Nilotinib+AUY922存在下にてIL-3非依存性増殖能を獲得した耐性化クローンをpick upした。各薬剤耐性化クローンよりDNAを抽出しPCRを用いて耐性化クローンにおけるBCR-ABL遺伝子の点突然変異の種類を解析し、ABLキナーゼ阻害剤の併用によるBCR-ABLの点突然変異の発生の抑制効果を検証した。Ni Iotinib 2μMにて耐性クローンはT3151、G334Vを検出。AUY922耐性クローンではWild type BCR-ABLのみであった。Nilotinib+AUY922では耐性クローンの検出は認めなかった。
2)In vivoにおけるAUY922+Nilotinibの併用効果の検討:Saturation mutagenesis screenをもちいて作成したBaF3細胞をヌードマウスに移植し(1)Nilotinib、(2)AUY922、(3)Nilotinib+AUY922の併用効果について解析した。Nilotinib+AUY922群では有意な生存期間の延長が確認された。ABLキナーゼ阻害剤とHSP90阻害剤との併用効果は耐性化クローンの出現を抑制するとともに、in vivoにおいても有効性が確認された。
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