| 研究課題/領域番号 |
19591252
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 研究分野 |
小児科学
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| 研究機関 | 徳島大学 |
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研究代表者 |
渡辺 浩良 徳島大学, 医学部・歯学部附属病院, 講師 (50423413)
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| 研究分担者 |
大西 敏弘 徳島大学, 大学院・へルスバ材サイエンス研究部, 助教 (40423412)
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| 研究期間 (年度) |
2007 – 2008
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| 研究課題ステータス |
完了 (2008年度)
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| 配分額 *注記 |
2,730千円 (直接経費: 2,100千円、間接経費: 630千円)
2008年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2007年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | 末梢血幹細胞 / 破骨細胞 / IL-8 / MMP-9 / CD26 / CXCR4 |
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| 研究概要 |
既報に従って、末梢血単核球から破骨細胞を誘導し(Blood 2004 104 : 2484-)、RANKLとM-CSFを添加して培養した. この破骨細胞に、G-CSF(10、100ng/ml)、RANKL(50ng/ml)、G-CSF(10、100ng/ml)+RANKL(50ng/ml)を添加培養し、培養上清を採取した(1、3、5日)。培養上清を用いて各種サイトカインを測定した。測定したサイトカインは、IL-8、MMP-9、cathepsinKである。その結果、破骨細胞はin vitroでIL-8、MMP-9を産生していることが証明出来たが、G-CSFやRANKLの添加による産生の変化(増加)は証明できなかった。cathepsin Kの産生は証明できなかった。末梢血幹細胞動員における破骨細胞の関与が、IL-8やMMP-9、cathepsin Kを介したものである可能性が示唆されているが、G-CSFの破骨細胞に対する直接作用ではなく、その他の細胞など介した作用であると考えられた。また、RANKLによる末梢血幹細胞動員促進の可能性を示すことができなかった。
G-CSFで動員・採取した末梢血幹細胞からCD34陽性細胞分画を分離した。CD34陽性細胞に発現しているCD26、CXCR1、CXCR2、CXCR4をフローサイトメーターで測定した。CD34陽性細胞を無血清培地(STEMPRO-34^R)で培養し、培養細胞にG-CSF(100ng/ml)、IL-8(500pg/m1)、G-CSF(100ng/m1)+IL-8(500pg/m1)を添加した。培養細胞に発現している CD26、CXCR1、CXCR2、CXCR4をフローサイトメーターで測定した。
D26、CXCR1、CXCR2、CXCR4は、CD34陽性細胞分離直後には発現が無かったが、無血清培地のみで発現の増強がみられた。しかし、G-CSFやIL-8の添加による発現の変化は認めず、末梢血幹細胞動員促進の可能性を示すことができなかった。
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