高解像度光学顕微鏡によるシナプス内部構造の検出

• 研究課題/領域番号: 19650084
• 研究種目: 萌芽研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 神経解剖学・神経病理学
• 研究機関: 東京大学
• 研究代表者: 岡部 繁男 東京大学, 大学院・医学系研究科, 教授 (60204012)
• 研究期間 (年度): 2007 – 2008
• 研究課題ステータス: 完了 (2008年度)
• 配分額: 3,300千円 (直接経費: 3,300千円); 2008年度: 600千円 (直接経費: 600千円); 2007年度: 2,700千円 (直接経費: 2,700千円)
• キーワード: シナプス / 全反射顕微鏡 / 一分子 / 光スイッチ / 足場蛋白質

研究概要

中枢神経シナプスは神経細胞間の情報伝達の場であり、そこに局在する分子の分布を高い解像度で測定する事は、シナプスでの構造と機能の関連を理解する上できわめて重要である。中枢神経系の興奮性シナプスは、そのサイズが数ミクロンと小さいが、STORM顕微鏡を利用して高解像度の分子分布を知ることが出来れば、シナプス内部構造についての理解が格段に進展すると考えられる。この目的の為、前年度に引き続き以下の実験を行った。
1.STORM顕微鏡によるシナプス観察 対物レンズ型の全反射顕微鏡を使用して、一分子蛍光像を取得した。光スイッチとしてはPSD95-YFP,Homer-YFP,mGluR5-YFPを使用し、これらの蛋白質を海馬の分散培養神経細胞内にアデノウィルスを、用いて発現させた。水銀ランプの紫外光により光スイッチをオンにして、一分子に由来する蛍光像を取得し、その重心位置を推定した。全ての蛍光スポットが消退した後、再度紫外光による光スイッチの活性化を行い、このサイクルを数百回反復して一分子由来の蛍光像を積算した。シナプス後部に対応する構造をSTORM法により検出することが可能となった。
2.STORM法による分子位置推定法の評価 分子の位置を推定する方法として、三種類の計算方法を用いたプログラムを作成し、それぞれの方法における誤差を、シミュレーションにより解析した。ガウス分布を直接フィットすることにより中心位置を計算するプログラムを利用すると、最も精度の高い分子位置の推定が出来ることが示された。この計算方法を適用して、PSD95-YFPの分布をシナプス後部上で推定し、通常の蛍光顕微鏡法による形態との比較を行った。光学的なボケを除去した画像が得られ、通常の蛍光顕微鏡画像よりも限局した範囲にPSDの足場蛋白質が局在している可能性が示唆された。

研究成果

• [雑誌論文] IQ decline and memory impaimlent in Japanese patients with chronic schizophrenia (2008)
  • 著者名/発表者名: Hori, H., Noguchi H., Hashimoto R., Okabe S., Saitoh O., and H. kunugi.
  • 雑誌名: Psychiaty Research 158 ページ: 251-255
  • 査読あり
• [雑誌論文] Co-localization of a novel transcriptional repressor simiRP58 with RP58 (2008)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, A., Hirai, S., Ohtaka-Maruyama, C., Miwa, A, Hata, Y., Okabe, S. and H. Okado
  • 雑誌名: Biochemical and Biophysical Research Communications 368 ページ: 637-642
  • 査読あり
• [雑誌論文] Regulation of dendritic spine morphlogy by an NMDA receptor-associated Rho GTP ase-activating protein, p250GAP (2008)
  • 著者名/発表者名: Nakazawa, T., Kuriu, T., Tezuka, T., Umemori, H., Okabe, S., and Yamamoto, T.
  • 雑誌名: Journal of Neurochemistry 105 ページ: 1384-1393
  • 査読あり
• [雑誌論文] Schistypal trains in healthy women predict prefrontal activation patterns during a verbal fluency task: A near-infrared spectroscopy study (2008)
  • 著者名/発表者名: Hori, H., Nagamine, M., Soshi, T., Okabe, S., Kim, Y., and H. Kunugi
  • 雑誌名: Neuropsychobiology 57 ページ: 61-69
  • 査読あり
• [雑誌論文] Personality in schizophrenia assessed with the Temperament and Character lnventory(TCI) (2008)
  • 著者名/発表者名: Hori, H., Noguchi, H., Hashimoto, R., Nakabayashi, T., Saitoh, O., Murray, R. M., Okabe, S., and H. Kunugi
  • 雑誌名: Psychiatly Research 160 ページ: 175-183
  • 査読あり
• [雑誌論文] Reciprocal interaction with G-actin and tropomyosin is essential for aquaporin-2 trafficking (2008)
  • 著者名/発表者名: Noda, Y., Horikawa, S, Kanda, E., Yamashita, M., Meng, H., Eto, K., Kuwahara, M. Hirai, K., Pack, C., Kinjo, M., Okabe, S., and S., Sasaki
  • 雑誌名: Journal of Cell Biology 182 ページ: 587-601
  • 査読あり
• [雑誌論文] Regulation of dendritic spine morphology by an NMDA receptor-associated Rho GTPase-activating protein, p250GAP (2008)
  • 著者名/発表者名: Nakazawa, T., Kuriu, T., Tezuka, T., Umemori, H., Okabe, S., and Yamamoto, T.
  • 雑誌名: Journal of Neurochemistry in press(印刷中)(掲載確定)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Co-localization of a novel transcriptional repressor simiRP58 with RP58 (2008)
  • 著者名/発表者名: Takahashi, A., Hirai, S., Ohtaka-Maruyama, C., Miwa, A., Hata, Y., Okabe, S. and H. Okado
  • 雑誌名: Biochemical and Biophysical Research Communications 368 ページ: 637-642
  • 査読あり
• [雑誌論文] IQ decline and memory impairment in Japanese patients with chronic schizophrenia (2008)
  • 著者名/発表者名: Hori, H., Noguchi H., Hashimoto R., Okabe S., Saitoh O., and H. Kunugi.
  • 雑誌名: Psychiatry Research 158 ページ: 251-255
  • 査読あり
• [雑誌論文] Molecular anatomy of the postsynaptic density. (2007)
  • 著者名/発表者名: Okabe, S.
  • 雑誌名: Molecular and Cellular Neuroscience 34 ページ: 503-518
  • 査読あり
• [雑誌論文] The Secl/Munc18 family protein, VPS-45, is required for RAB-5-dependent endocytic trafficking in C. elegans (2007)
  • 著者名/発表者名: Gengyo-Ando, K., Kuroyanagi, H., Kobayashi, T., Murate, M., Fujimoto, K., Okabe. S. and S. Mitani
  • 雑誌名: EMBO Reports 8 ページ: 152-157
  • 査読あり
• [雑誌論文] Direct astrocytic contacts regulate local maturation of dendritic spines. (2007)
  • 著者名/発表者名: Nishida, H. and S. Okabe
  • 雑誌名: Journal of Neuroscience 27 ページ: 331-340
  • 査読あり
• [学会発表] Molecular mechanism of synapse formation in the cortex (2008)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: 第31回日本分子生物学会年会・第81回日本生化学会大会 合同大会
  • 発表場所: 兵庫県神戸市 神戸ポートアイランド
  • 年月日: 2008-12-10
• [学会発表] 光学顕微鏡によるシナプス動態の解析 (2008)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: 日本顕微鏡学会第52回シンポジウム「顕微鏡の最先端科学への貢献」
  • 発表場所: 千葉県千葉市 千葉大学西千葉キャンパス
  • 年月日: 2008-10-18
• [学会発表] 二光子顕微鏡による生体・組織イメージング (2008)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: 第17回浜松医科大学メディカルホトニクス・コース
  • 発表場所: 静岡県浜松市 浜松医科大学
  • 年月日: 2008-07-29
• [学会発表] 出生後の脳発達においてRcclの果たす核一細胞質間物質輸送の機能 (2008)
  • 著者名/発表者名: 西井清雅、西本毅治、橋爪華奈子、熊井まどか、宮野有美、柴田洋三郎、岡部繁男
  • 学会等名: 第31回日本神経科学大会
  • 発表場所: 東京都千代田区 東京国際フォーラム
  • 年月日: 2008-07-11
• [学会発表] 断片化Cre recombinase会合に対する二量体結合因子の促進効果と神経細胞へ|の応用に関する研究 (2008)
  • 著者名/発表者名: 丸尾知彦、海老原達彦、佐藤映美、根東覚、岡部繁男
  • 学会等名: 第31回日本神経科学大会
  • 発表場所: 東京都千代田区 東京国際フォーラム
  • 年月日: 2008-07-11
• [学会発表] 遺伝子改変マウスによるコルクチンの神経細胞内機能解析 (2008)
  • 著者名/発表者名: 田中慎二、佐藤隆史、原田彰宏、岡部繁男
  • 学会等名: 第31回日本神経科学大会
  • 発表場所: 東京都千代田区 東京国際フォーラム
  • 年月日: 2008-07-10
• [学会発表] 活動性操作時の神経細胞移動のイメージング (2008)
  • 著者名/発表者名: 水口泰介、根東覚、岡部繁男
  • 学会等名: 第31回日本神経科学大会
  • 発表場所: 東京都千代田区 東京国際フォーラム
  • 年月日: 2008-07-10
• [学会発表] NMDA受容体に会合するp250GAPによるRhoAシグナリングの制御 (2008)
  • 著者名/発表者名: 中澤敬信、栗生俊彦、岡部繁男、山本雅
  • 学会等名: 第31回日本神経科学大会
  • 発表場所: 東京都千代田区 東京国際フォーラム
  • 年月日: 2008-07-09
• [学会発表] 統合失調症型人格傾向と語流暢課題遂行中の前頭前野賦活パターン:NIRSによる検討 (2008)
  • 著者名/発表者名: 堀弘明、永岑光恵、曽雌崇弘、岡部繁男、寺田純雄、金吉晴、功刀浩
  • 学会等名: 第31回日本神経科学大会
  • 発表場所: 東京都千代田区 東京国際フォーラム
  • 年月日: 2008-07-09
• [学会発表] 発生期皮質における樹状突起とシナプスのリモデリング (2008)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: 第31回日本神経科学大会
  • 発表場所: 東京都千代田区 東京国際フォーラム
  • 年月日: 2008-07-09
• [学会発表] Organization and dynamics of postsynaptic molecules. (2008)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: 5th APICA Meeting
  • 発表場所: Teheran, Iran
  • 年月日: 2008-05-17
• [学会発表] Imaging glia-synapse interactions. (2008)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: NIPS-JST Intemational Workshop -From photon to mind -Advanced Nonlinear lmaging & Fluorescence-based Biosensors.
  • 発表場所: 愛知県岡崎市 岡崎コンファレンスセンター
  • 年月日: 2008-04-18
• [学会発表] Imaging glia-synapse interactions. (2008)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: Experimental Biology 2008 (Annual Meeting of Professional Research Scientists)
  • 発表場所: San Diego, USA
  • 年月日: 2008-04-06
• [学会発表] 出生後の脳発達においてRcc1の果たす核-細胞質間物質輸送の機能 (2008)
  • 著者名/発表者名: 西井清雅, 西本毅治, 橋爪華奈子, 熊井まどか, 宮野有美, 柴田洋三郎, 岡部繁男
  • 学会等名: 第113回日本解剖学会総会・全国学術集会
  • 発表場所: 大分県由布市
  • 年月日: 2008-03-27
• [学会発表] 脳の生理機能と病態における神経・グリア相互作用の新しい役割 (2008)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: 第85回日本生理学会大会シンポジウム「グリア細胞を統合した神経機能学の再構築」
  • 発表場所: 東京都新宿区
  • 年月日: 2008-03-25
• [学会発表] Formation of excitatory synapses and astrocytic contacts. (2008)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: USA-Japan Joint Meeting for Glial Research
  • 発表場所: Philadelphia, U.S.A.
  • 年月日: 2008-03-19
• [学会発表] グルタミン酸受容体のシナプスへの出入り:1分子法と多分子法による研究 (2007)
  • 著者名/発表者名: 中田千枝子, 土方博子, 吉田広人, 長谷川理恵, 岡部繁男, 楠見明弘
  • 学会等名: 第45回日本生物物理学会年会
  • 発表場所: 神奈川県横浜市
  • 年月日: 2007-12-23
• [学会発表] 出生後の脳発達においてRcc1の果たす核-細胞質間物質輸送の機能 (2007)
  • 著者名/発表者名: 西井清雅, 西本毅治, 橋爪華奈子, 熊井まどか, 宮野有美, 柴田洋三郎, 岡部繁男
  • 学会等名: 第30回日本分子生物学会年会 第80回日本生化学会大会 合同大会
  • 発表場所: 神奈川県横浜市
  • 年月日: 2007-12-13
• [学会発表] GFPイメージングによる神経機能へのアプローチ (2007)
  • 著者名/発表者名: 岡部 繁男
  • 学会等名: 第48回日本組織細胞化学会 第39回日本臨床分子形態学会 合同学術集会シンポジウム「バイオイメージングで生体機能を観る、測る」
  • 発表場所: 山梨県甲府市
  • 年月日: 2007-09-28
• [学会発表] 微小管結合蛋白doublecortin-like kinase1の神経細胞内動態 (2007)
  • 著者名/発表者名: 申 義庚, 岡部繁男
  • 学会等名: 第30回日本神経科学大会
  • 発表場所: 神奈川県横浜市
  • 年月日: 2007-09-11
• [学会発表] 主観的ストレスはDEX/CRHテストで測定したコルチゾールやアルギニン・バソプレッシン値と関連する (2007)
  • 著者名/発表者名: 堀 弘明, 岡部繁男, 功刀 浩
  • 学会等名: 第30回日本神経科学大会
  • 発表場所: 神奈川県横浜市
  • 年月日: 2007-09-11
• [学会発表] 海馬錐体細胞と介在細胞におけるグルタミン酸作動性シナプス後部の分子構築と動態の相違 (2007)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: 第30回日本神経科学大会 シンポジウム「シナプス形成と機能獲得」
  • 発表場所: 神奈川県横浜市
  • 年月日: 2007-09-10
• [学会発表] Assembly and movement of glutamatergic synapses. (2007)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: 2nd Westerburg Symposium on"Molecular Dynamics of Chemical Synapse"
  • 発表場所: Dedeleben, Germany
  • 年月日: 2007-08-20
• [学会発表] GFPの基礎と応用 (2007)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: 第32回組織細胞化学講習会
  • 発表場所: 京都府京都市
  • 年月日: 2007-08-07
• [学会発表] GFP-based imaging of excitatory synapses in the nervous system. (2007)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: EMBO Practical Course, "Imaging in 3-D and the F-technilues: FRET, FCS, FLIM and FRAP."
  • 発表場所: Biopolis, Singapore
  • 年月日: 2007-06-25
• [学会発表] Quantitative time-lapse imaging of glutamatergic synapses in the hippocampus. (2007)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: Gordon Research Conference, "Excitatory Synapses & Brain Function"
  • 発表場所: New London, U.S.A.
  • 年月日: 2007-06-14
• [学会発表] シナプス後部蛋白質のイメージング (2007)
  • 著者名/発表者名: 岡部繁男
  • 学会等名: 日本顕微鏡学会 第63回学術講演会シンポジウム「神経情報処理過程のイメージング:分子から個体へ」
  • 発表場所: 新潟県新潟市
  • 年月日: 2007-05-21
• [備考]
  • URL: http://synapuse.m.u-tokyo.ac.jp/