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RNA干渉を用いたインビボ神経節遺伝子発現ノックダウン法の臨床応用可能性の検証

研究課題

研究課題/領域番号 19650095
研究種目

挑戦的萌芽研究

配分区分補助金
研究分野 神経化学・神経薬理学
研究機関東京慈恵会医科大学

研究代表者

加藤 総夫  東京慈恵会医科大学, 医学部, 教授 (20169519)

研究期間 (年度) 2007 – 2009
研究課題ステータス 完了 (2009年度)
配分額 *注記
3,400千円 (直接経費: 3,400千円)
2009年度: 500千円 (直接経費: 500千円)
2008年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2007年度: 2,200千円 (直接経費: 2,200千円)
キーワード脳・神経 / 神経科学 / 生理学 / シグナル伝達 / トランスレーショナルリサーチ / RNA干渉 / 遺伝子治療 / ATP受容体
研究概要

In vivo神経節gene silencing法の方法を昨年度までに確立した。同方法を応用し、内臓由来一次求心線維の脳内終末に発現すると予想されているP2X3サブユニット分子(p2x3r)をノックダウンしたところ、導入11-15日後、孤束核におけるP2X3サブユニットタンパクの発現はsiRNA導入側特異的にほぼ半減した。ATPおよびα,β-methylene ATPの効果を定量的に評価したところ、siRNA導入によってα,β-methylene ATPの作用が約45%まで著明にかつ有意に減少した。脱感作の遅いP2X2/3ヘテロ受容体型の応答がP2X2ホモ受容体型に変化した可能性が強く支持された。本年度は、以上の成果を公表するための論文作成に必要となる追加実験を主に行った。残念ながら、本報告書の執筆時点では投稿論文受理に至っていないが、速やかに公開し、この方法を広くさまざまな分子に応用すべく、見学者を広く受け入れ、技術の公開に務めた。また、両側性の電気穿孔法も、体重の減少、行動上の異常などの問題なく行うことが可能となり、in vivoへの応用も可能であることが示された。一方、新たな問題点として、迷走神経求心路の発現分子特性の左右差が予想以上に大きいこと、一次求心神経終末発現分子と類似のしかし薬理学的性質の異なる分子が脳内に発現しており、そのノックダウンの効果が予想以上に単純ではないこと、などの新たな知見が得られたため、本技術を公開した後に新たに取り組む必要がある。

報告書

(3件)
  • 2009 実績報告書
  • 2008 実績報告書
  • 2007 実績報告書
  • 研究成果

    (22件)

すべて 2009 2008 2007 その他

すべて 雑誌論文 (9件) 学会発表 (12件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Presynaptic P2X receptors as astrocyte-neuron interface2009

    • 著者名/発表者名
      Kato F
    • 雑誌名

      The Journal of Physiological Sciences 59S

      ページ: 73-73

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [雑誌論文] Visualization of vagal afferent neurons involved in energy expenditure control by activation of TRPV1 in digestive tract2009

    • 著者名/発表者名
      Ono, K, Yasui M, Kimura Y, Inoue N, Nogusa Y, Okebe Y, Kato F
    • 雑誌名

      The Journal of Physiological Sciences 59S

      ページ: 474-474

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [雑誌論文] Gastrointestinal TRPV1 activation enhances sympathetic outflow to brown adipose tissue2009

    • 著者名/発表者名
      Yasui M, Ono K, Kimura Y, Inoue N, Nogusa Y, Okabe Y, Nagashima K, Kato F
    • 雑誌名

      The Journal of Physiological Sciences 59S

      ページ: 383-383

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [雑誌論文] Gastrointestinal TRPV1 activation increases vagal afferent discharge2009

    • 著者名/発表者名
      Kimura Y, Yasui M, Ono K, Inoue N, Nogusa Y, Okabe Y, Kato F
    • 雑誌名

      The Journal of Physiological Sciences 59S

      ページ: 474-474

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [雑誌論文] Alteration of pharmacological phenotype of the presynaptic heteromeric P2Xreceptors by in-vivo gene silencing of P2X3 subunit of the rat2009

    • 著者名/発表者名
      Tamura T, Suzuki T, Kato F
    • 雑誌名

      Journal of Pharmacological Sciences 109

      ページ: 81-81

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [雑誌論文] Analysis of the morpho-functional properties of the astrocytes using GFAP-GFP mice2009

    • 著者名/発表者名
      Wako M, Imura T, Suzuki T, Kato F
    • 雑誌名

      Journal of Pharmacological Sciences 109

      ページ: 70-70

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [雑誌論文] Emerging role of monocarboxylate transporters in the synaptic activity in the nucleus of the solitary tract2009

    • 著者名/発表者名
      Nagase M, Suzuki T, Kato F
    • 雑誌名

      Journal of Pharmacological Sciences 109

      ページ: 161-161

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [雑誌論文] Astrocytic facilitation of excitatory synaptic transmission involving presynaptic P2x receptors2008

    • 著者名/発表者名
      Taiko Imura, Nami Hasegwa, Mika Wako
    • 雑誌名

      Neuroscience Research Suppl. 1

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [雑誌論文] In vivo manipulation of protein expression by gene transfer and silencing atthe primary afferent neurons2008

    • 著者名/発表者名
      Tomoyasu Tamura, Chiaki Yamada, Eiji Shigetomi, Takeshi Suzuki
    • 雑誌名

      Neuroscience Research Suppl. 1

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] Gastrointestinal TRPV1 activation enhances sympathetic outflow to brown adipose tissue2009

    • 著者名/発表者名
      Yasui M, Ono K, Kimura Y, Inoue N, Nogusa Y, Okabe Y, Nagashima K, Kato F
    • 学会等名
      36th International Congress of Physiological Sciences
    • 発表場所
      京都
    • 年月日
      2009-07-31
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] Conversion of pharmacological phenotype of the presynaptic heteromeic P2X receptors by in-vivo gene silencing2009

    • 著者名/発表者名
      Tamura T, Yamada C, Imura T, Shigetomi E, Kato F
    • 学会等名
      Fukuoka Purine 2009
    • 発表場所
      福岡
    • 年月日
      2009-07-23
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] 脳内シナプス前受容体分子構成のin vivo gene silencingによる修飾と作動薬感受性の人工的変換2009

    • 著者名/発表者名
      田村友穏, 鈴木岳之, 加藤総夫
    • 学会等名
      第82回日本薬理学会年会
    • 発表場所
      横浜
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 孤束核シナプス活動の維持におけるモノカルボン酸トランスポーターの役割2009

    • 著者名/発表者名
      永瀬将志, 鈴木岳之, 加藤総夫
    • 学会等名
      第82回日本薬理学会年会
    • 発表場所
      横浜
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 脳内シナプス前P2X受容体の意義2009

    • 著者名/発表者名
      加藤総夫
    • 学会等名
      日本薬学会第129回年会
    • 発表場所
      京都
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 孤束核一次求心線維終末シナプス前受容体チャネル・サブタイプのRNA干渉法による転換2008

    • 著者名/発表者名
      田村友穏, 山田千晶, 繁冨英治, 加藤総夫
    • 学会等名
      第36回 自律神経生理研究会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2008-12-06
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] Specificity of astrocyte-neuron interaction in the nucleus of the solitary tract2008

    • 著者名/発表者名
      Kato F
    • 学会等名
      第242回日本生理学会東京談話会
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2008-10-26
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] Presynaptic extracellular purine receptors as an interface between glia and neuron networks2008

    • 著者名/発表者名
      Kato F
    • 学会等名
      23rd Annual Meeting of the Federation of Societies of Experimantal Biology
    • 発表場所
      Aguas de Lindoia, Sao Paulo, Brazil
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] In vivo gene silencing法による脳内シナプス前P2X受容体サブタイプの変換2008

    • 著者名/発表者名
      田村友穏, 加藤総夫
    • 学会等名
      平成20年度生理研研究会『病態と細胞外プリン-治療標的としての可能性を探る
    • 発表場所
      岡崎
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] Gene silencing and transfer of presynaptic proteins at the rat primary afferent ganglion in vivo2008

    • 著者名/発表者名
      加藤 総夫
    • 学会等名
      基礎生物学研究所研究会遺伝子導入法の神経研究への応用
    • 発表場所
      岡崎
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] In vivo神経節ノックダウン法を用いたシナプス前分子の機能解析2007

    • 著者名/発表者名
      田村 友穏、山田 千晶、鈴木 岳之、加藤 総夫
    • 学会等名
      第1回先端分子薬理学研究会.
    • 発表場所
      東京
    • 年月日
      2007-10-13
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] In vivo gene silencing of mammalian presynaptic adenosine receptors2007

    • 著者名/発表者名
      Kato, F
    • 学会等名
      Second Joint Italian-German Purine Club Meeting
    • 発表場所
      Leipzig, Germany
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [備考]

    • URL

      http://www.jikei.ac.jp/lnp/index.htm

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書

URL: 

公開日: 2007-04-01   更新日: 2016-04-21  

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