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遺伝子工学を用いた脳内摂食調節ニューロンネットワーク解析法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 19659047
研究種目

萌芽研究

配分区分補助金
研究分野 解剖学一般(含組織学・発生学)
研究機関昭和大学

研究代表者

塩田 清二  昭和大学, 医学部, 教授 (80102375)

研究分担者 影山 晴秋  昭和大学, 医学部, 助教 (00433839)
荒田 悟  昭和大学, 遺伝子組換え実験室, 准教授 (20159502)
研究期間 (年度) 2007 – 2008
研究課題ステータス 完了 (2008年度)
配分額 *注記
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
2008年度: 1,600千円 (直接経費: 1,600千円)
2007年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
キーワード遺伝子工学 / ガラニン様ペプチド / トランスジェニックマウス / 摂食調節 / ニューロンネットワーク
研究概要

本年度はGALP遺伝子転写調節領域の下流にCreリコンビナーゼとタモキシフェン受容体融合タンパク質cDNAを導入したDNAコンストラクトを用いたトランスジェニックマウスの作出を行った。トレーサーとなる蛍光タンパク質を細胞中に高発現させるためにCre-loxPシステムを用いた。これは蛍光タンパク質の発現が目的となる遺伝子のプロモーター活性に依存することなく、強力なプロモーター活性をもつCAGプロモーターによって転写調節をうけるので、トレーサーの発現量は顕著に増大した。GALP mRNA発現は、生後14日目以降に発現することが言われているが、発生期あるいは胎生期に発現するかどうかは不明である。成体におけるニューロンネットワークを可視化することを目的とするので、発生期や胎生期にはトレーサーとなる蛍光タンパク質の発現を抑制しておかなければならない。そこでタモキシフェン(エストロゲン誘導体)特異的に結合するエストロゲン変異受容体とCreリコンビナーゼとの融合タンパク質にすることで、タモキシフェンが結合するまではCreリコンビナーゼは活性化しないというメリットがあるので、時間的にCreリコンビナーゼの活性化を調節した。GALP遺伝子の転写調節領域がどこにあるのか不明なため、GALP遺伝子が導入されているBAC(バクテリア人工染色体)クローンを用いた。Cre-タモキシフェン受容体cDNAを、そのBACクローンに導入した。BACクローン内で相同組換えを起こさせ、組み換わった8ACを調製し、これを受精卵へのインジェクション用のサンプルとした。肥満研究で主に使われている系統であるC57BL/6Jの受精卵へDNAを注入してトランスジェニックマウスの作出に成功した。さらにこのマウスを用いてCreリコンビナーゼが認識するloxP配列導入トランスジェニックマウスの作出にも成功した。

報告書

(2件)
  • 2008 実績報告書
  • 2007 実績報告書
  • 研究成果

    (16件)

すべて 2008 2007

すべて 雑誌論文 (12件) (うち査読あり 12件) 学会発表 (4件)

  • [雑誌論文] Neural networks of several novel neuropeptides involved in feedingregulation.2008

    • 著者名/発表者名
      Shioda s, et al.
    • 雑誌名

      Nutrition 24

      ページ: 848-853

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Neuronal interaction between melanin-concentrating hormone- and alpha-melanocyte-stimulating hormone-containing neurons in the goldfish hypothalamus.2008

    • 著者名/発表者名
      Shimakura S, et al.
    • 雑誌名

      Peptides 29

      ページ: 1432-1440

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Delivery of galanin-like peptide to the brain : targeting with intranasal delivery and cyclodextrins.2008

    • 著者名/発表者名
      Nonaka N, et al.
    • 雑誌名

      J Pharmacol Exp Ther 325

      ページ: 513-519

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Visualization of ghrelin-producing neurons in the hypothalamicarcuate nucleus using ghrelin-EGFP transgenic mice.2008

    • 著者名/発表者名
      Kageyama H, et al.
    • 雑誌名

      Regul Pept 145

      ページ: 116-121

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Synaptic interaction between ghrelin-and ghrelin-containing neuronsin the rat hypothalamus.2008

    • 著者名/発表者名
      Hori Y, et al.
    • 雑誌名

      Regul Pept 145

      ページ: 122-127

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Neuropeptide W in the rat pancreas : potentiation of glucose-induced insulin release and Ca2+ influxthrough L-type Ca2+ channels in beta-cells and localization in islets.2008

    • 著者名/発表者名
      Dezaki K, et al.
    • 雑誌名

      Regul Pept 145

      ページ: 153-158

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Visualization of ghrelin-producing neurons in the hypothalamic arcuate nucleus using ghrelin-EGFP transgenic mice2008

    • 著者名/発表者名
      Kageyama H.
    • 雑誌名

      Regul Pept. 145-1-3

      ページ: 116-121

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Synaptic relationships between proopiomelanocortin- and ghrelin-containing neurons in the rat arcuate nucleus2008

    • 著者名/発表者名
      Guan JL.
    • 雑誌名

      Regul Pept. 145-1-3

      ページ: 128-132

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Synaptic interaction between ghrelin- and ghrelin-containing neurons in the rat hypothalamus2008

    • 著者名/発表者名
      Hori Y.
    • 雑誌名

      Regul Pept. 145-1-3

      ページ: 122-127

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Morphological interaction between galanin-like peptide- and dopamine-containing neurons in the rat arcuate nucleus2008

    • 著者名/発表者名
      Kageyama H.
    • 雑誌名

      Regul Pept. 145-1-3

      ページ: 165-168

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Neuronal interactions between neuropeptide W- and orexin- or melanin-concentrating hormone-containing neurons in the rat hypothalamus2008

    • 著者名/発表者名
      Takenoya F.
    • 雑誌名

      Regul Pept. 145-1-3

      ページ: 159-164

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Peptidomic identification and biological validation of neuroendocrine regulatory peptide-1 and -22007

    • 著者名/発表者名
      Yamaguchi H.
    • 雑誌名

      J Biol Chem. 282-36

      ページ: 323-331

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] Input of some feeding-regulating neurons revealed by a geneticallyencoded tracer.2008

    • 著者名/発表者名
      Kageyama H, Takenoya F. Shioda S
    • 学会等名
      XIII International congress of histochemistry and cytochemistry
    • 発表場所
      Gdansk, Poland
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 脳内における摂食調節-その機構解明と臨床応用について-2008

    • 著者名/発表者名
      塩田清二, 影山晴秋, 竹ノ谷文子
    • 学会等名
      第33回日本比較内分泌大会
    • 発表場所
      広島
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 摂食調節ニューロンの求心性神経回路網の形態機能解析2008

    • 著者名/発表者名
      影山 晴秋
    • 学会等名
      第113回日本解剖学会総会・全国学術集会
    • 発表場所
      大分大学医学部
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [学会発表] Cre-LoxPシステムによるCaMK II発現ニューロンのニューロンネットワークの解析2008

    • 著者名/発表者名
      影山 晴秋
    • 学会等名
      第113回日本解剖学会総会・全国学術集会
    • 発表場所
      大分大学医学部
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書

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公開日: 2007-04-01   更新日: 2016-04-21  

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