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組織標本上での遺伝子特定部位のメチル化シトシンin situ検出法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 19659086
研究種目

挑戦的萌芽研究

配分区分補助金
研究分野 人体病理学
研究機関神戸大学

研究代表者

北澤 荘平  神戸大学, 医学研究科, 特命教授 (90186239)

研究分担者 北澤 理子  神戸大学, 医学研究科, 特命講師 (00273780)
森 清  神戸大学, 医学研究科, 特命助教 (70432573)
研究期間 (年度) 2007 – 2009
研究課題ステータス 完了 (2009年度)
配分額 *注記
3,100千円 (直接経費: 3,100千円)
2009年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2008年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
2007年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
キーワード組織標本 / メチル化シトシン / 遺伝子プロモータ / in situ hybridization
研究概要

単一の受精卵に由来しながら、神経細胞から皮膚に至る多種多様な組織細胞分化が起こるメカニズムには。エピジェネティクス制御が重要とされている。メチル化シトシンは、エピジェネティクス制御機構の主体をなすDNA修飾であり、組織細胞分化や再生医療のみならず、腫瘍発生・進展においても重要である。特に、癌の個性に応じた薬物療法として、近年ではDNAメチル化阻害剤の適応について検索する手法が重要となる。私どもは、対象遺伝子の調節領域に存在するCpG-islandのシトシンメチル化を、細胞や組織の形態を維持したまま、in situで検出する組織化学的方法の開発についての検討を行った。
本年度は、部位特異的DNAメチル化に対して、メチル化シトシンとオスミウム酸により錯体形成するICONプローブ(bipyridine-adenine標識プローブ)に着目し、染色体上で標的DNAとICONプローブとを結合させて、強固な化学結合で固定し、このICONプローブをもとに染色体上でPRINS法を行う実験系を構築することを目指して予検討を行った。染色体上でICONプローブをもとにPCR反応を行う際に、標識化合物を取り込ませた後、標識化合物に対する免疫組織化学にてシグナルを検出する。特異的で高感度のプローブ結合やPCR反応、メチル化シトシン-標識グアニン複合体に対する単クローン抗体の作成が課題となる。本年度は、単クローン抗体作成法の予検討と、染色体標本上でのPRINS法施行についての検討を行った。特に、標本の固定やheat denatureの条件設定や、標本上でのDNA合成進展に最適な酵素試薬の検定などを施行した。効率的なマウス免疫方法や、脾臓リンパ球回収、ミエローマ細胞との細胞融合、HAT培地による選択培養については、最適な実験系を整備することが出来た。

報告書

(3件)
  • 2009 実績報告書
  • 2008 実績報告書
  • 2007 実績報告書
  • 研究成果

    (13件)

すべて 2009 2008 2007

すべて 雑誌論文 (9件) (うち査読あり 9件) 学会発表 (3件) 図書 (1件)

  • [雑誌論文] BAMBI gene is epigenetically silenced in a subset of high-grade bladder cancer2009

    • 著者名/発表者名
      Sann Sanda Khin, et al.
    • 雑誌名

      Int J Cancer 125

      ページ: 328-338

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Ce promotes intestinal tumorigenesis of ApcMin/+ mice through augmentation of inflammation and angiogenesis2009

    • 著者名/発表者名
      Li M., et al.
    • 雑誌名

      Carcinogenesis 30

      ページ: 1424-1432

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Thioredoxin-1 overexpression in transgenic mice attenuates streptozotocin-induced diabetic osteopenia2009

    • 著者名/発表者名
      Hamada Y., et al.
    • 雑誌名

      Bone 44

      ページ: 936-941

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Lipopolysaccharide suppresses RANK gene expression by macrophage through the down-regulation of PU.1 and MITF2008

    • 著者名/発表者名
      Ishii J., et al.
    • 雑誌名

      J Cell Biochem 105

      ページ: 896-904

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Modulation of mouse RANKL gene expression by Runx2 and vitamin D3 pathway.2008

    • 著者名/発表者名
      Kitazawa R., et al.
    • 雑誌名

      J Cell Biochem 105

      ページ: 1289-1297

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] MeCP2 expression and promoter methylation of cyclin D1 gene are asso ciated with cyclin D1 expression in developing rat epididymalduct2008

    • 著者名/発表者名
      Darwanto A., et al.
    • 雑誌名

      Acta Histochem Cytochem 41

      ページ: 135-142

    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Dexamethasone Promotes Osteoclastogenesis by Inhibiting Osteoprotegerin through Multiple Levels.2007

    • 著者名/発表者名
      Kondo T., et. al.
    • 雑誌名

      J Cell Biochem 103

      ページ: 335-345

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Histomorphometric Analysis of Diabetic Osteopenia in Streptozotocin-induced Diabetic Mice: a Possible Role of Oxidative Stress.2007

    • 著者名/発表者名
      Hamada Y., et. al.
    • 雑誌名

      Bone 40

      ページ: 938-943

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Unsuspected Uterine Leiomyosarcoma: MR Imaging Findings before and after Focused Ultrasound Surgery(FUS)2007

    • 著者名/発表者名
      Fukunishi H., et. al.
    • 雑誌名

      Int J Gynecolog Cancer 17

      ページ: 724-728

    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] マウスRANK遺伝子転写におけるNFATの機能解析2009

    • 著者名/発表者名
      北澤理子, 他
    • 学会等名
      第98回日本病理学会総会
    • 発表場所
      国立京都国際会館(京都府)
    • 年月日
      2009-05-03
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] 転写早期の新生mRNAの電子顕微鏡による動態解析2008

    • 著者名/発表者名
      北澤荘平, 他
    • 学会等名
      第49回日本組織細胞化学会総会シンポジウム
    • 発表場所
      長崎
    • 年月日
      2008-10-05
    • 関連する報告書
      2008 実績報告書
  • [学会発表] 日本、ミャンマー両国の膀胱腫瘍発生に関するエピジェネティクス解析2007

    • 著者名/発表者名
      Sann Sanda Khin
    • 学会等名
      第66回日本癌学会学術総会
    • 発表場所
      横浜
    • 年月日
      2007-10-04
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書
  • [図書] DNA Methylation Research Trends2007

    • 著者名/発表者名
      T. B. Kobayashi
    • 総ページ数
      200
    • 出版者
      Nova Science Publishers Inc
    • 関連する報告書
      2007 実績報告書

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公開日: 2007-04-01   更新日: 2016-04-21  

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